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01/03/2011 - 01/12/2013

Ciências Biológicas - Imunologia - Imunologia Aplicada

A leptospirose é doença infecciosa que acomete todos os mamíferos, inclusive o homem, sendo causada por bactérias patogênica do gênero Leptospira. A enfermidade possui importância em saúde pública e as atividades ocupacionais, assim como atividades recreativas que implicam no contato com águas contaminadas são fatores de risco para o contágio (Adler and de la Pena, 2010). A leptospirose suína está classificada como uma doença da lista B, no Office International dês Épizooties, grupo ao qual pertencem as doenças transmissíveis de grande importância do ponto de vista sócio-econômico e/ou sanitário, com considerável repercussão no comércio internacional de animais e de produtos de origem animal (PERRY; HEARDY, 2000). Contudo, o maior impacto econômico da doença está restrito a criações industriais do hemisfério Norte, Nova Zelândia, Argentina e Brasil (MAILLOUX, 2001). No Brasil, a leptospirose em suínos tem sido uma das principais causas de falhas reprodutivas em vários estados, principalmente nas regiões sul e sudeste do país (LANGONI et al., 1995). O número de abortamentos em fêmeas recém-infectadas pode chegar a mais de 20%, reduzindo o número de leitões desmamados por porca/ ano (FERREIRA NETO et al.,1997). Portanto, o diagnóstico diferencial da leptospirose de outras doenças infecciosas, os quais resultam em baixa na produção animal, é importante para instituição e monitoramento de programas de controle sanitário. O diagnóstico laboratorial da leptospirose está baseado principalmente na detecção de anticorpos circulantes no sangue (BRIHUEGA, 2008). A técnica padrão de diagnóstico, chamada soroaglutinação microscópica (MAT), tem sido utilizada tanto em soros animais como de humanos (FAINE, 1999; LEVETT, 2001; WHO, 2003). Porém a MAT, apesar da alta especificidade, possui baixa sensibilidade atribuída à impossibilidade do uso de todos os sorovares no diagnóstico, curva de crescimento bacteriano e concentração de bactérias. Além disto, é uma técnica laboriosa, necessitando o cultivo permanente no laboratório e a manutenção da virulência de cepas, e requerer profissionais treinados para realização da leitura comparativa com sorovares controles (OIE, 2008; FAINE, 1999). Na última década, a intensificação do estudo molecular da Leptospira resultou na identificação e caracterização de várias proteínas quanto a sua presença exclusiva em leptospiras patogênicas, expressão in vitro e in vivo e localização na célula bacteriana (HAAKE et al., 1993; SHANG; SUMMERS; HAAKE, 1996; HAAKE et al., 1998; HAAKE et al., 1999; HAAKE et al., 2000; PALANIAPPAN et al., 2002; CULLEN et al., 2005). Entre estas, a proteína LipL32, na sua forma recombinante (rLipL32) tem sido citada em estudos de desenvolvimento de testes diagnósticos para humanos e animais (DEY et al., 2007; DEY et al., 2004; BOMFIM; KO; KOURY, 2005; McBRIDE et al., 2005) pela característica de expressão constante, presença em todas a cepas de Leptospira patogênica e ausência em bactérias saprófitas (HAAKE et al., 2000), localização na membrana externa da bactéria e acessibilidade aos anticorpos do hospedeiro infectado (MATSUNAGA et al., 2003). Porém, independente da sensibilidade e especificidade destes testes diagnósticos relatados, não estão disponíveis para uso na rotina clínica do médico veterinário ou para estudos de epidemiologia sorológica na população de suínos. Por este motivo, o objetivo deste projeto é o desenvolvimento de um teste diagnóstico rápido, baseado na identificação de anticorpos no soro de suínos utilizando o antígeno protéico LipL32, imunodominante e presente em todos os sorovares patogênicos, em um ensaio imunoenzimático, viabilizando o diagnóstico em populações animais pelo baixo custo, praticidade e rapidez.