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04/04/2012 - 04/04/2016

Ciências Biológicas - Imunologia - Imunologia Aplicada

A Ehrlichia canis é a responsável pela erliquiose monocitica canina (EMC), doença considerada endêmica principalmente nas áreas urbanas. A infecção dos hospedeiros vertebrados por E. canis ocorre quando carrapatos infectados se alimentam e sua secreção salivar infectada com erliquia é inoculada no local da picada. O período de incubação da EMC é de 8 a 20 dias; a doença apresenta três fases: aguda, subclínica e crônica. As espécies de E. canis são transmitidas para o cão e para o homem pelo carrapato da espécie Rhipicephalus sanguineus. O diagnóstico é realizado através de esfregaços sanguíneos, métodos sorológicos ou reação em cadeia da polimerase (PCR), sendo a Imunofluorescência o método mais utilizado. Recentemente E. canis, foi descrita como sendo capaz de causar doença grave em humanos, com casos de óbito principalmente em crianças e idosos. A proteína GP19 é um importante antígeno imunodominante, pois induz rápida resposta imunológica nos cães. A similaridade entre as amostras geograficamente distintas sugere que a proteína GP19 possa ser usada para ensaios de imunoenzimáticos de diagnóstico, bem como em programas vacinais, pois esta proteína é especifica para E. canis não tendo assim reações cruzadas com outros gêneros de Ehrlichia. Este estudo teve como objetivo a clonagem da glicoproteína 19 de Ehrlichia canis em Escherichia coli para ser utilizada como antígeno na detecção rápida e precisa desta doença. O gene gp 19 foi amplificado pela reação da polimerase em cadeia (PCR) utilizando oligonucleotídeos iniciadores específicos contendo sítios para enzimas de restrição. O produto da PCR, após digestão, foi purificado e clonado no vetor pAE e inserido em E. coli TOP 10 competente por eletroporação. Dos clones identificados extraiu-se o plasmídio, o qual foi digerido com as enzimas de restrição e sequenciado para comprovar a presença do inserto. Após seleção dos clones recombinantes contendo o gene ligado ao vetor, este foi purificado e inserido por choque térmico na cepa de expressão, cultivado e induzido para expressar a proteína GP19. Esta proteína será utilizada como antígeno em um teste de imunodiagnostico.