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30/10/2013 - 01/06/2016

Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Fisiopatologia da Reprodução Animal

Fatores produzidos pelo oócito são considerados os principais reguladores do crescimento e diferenciação folicular. Entretanto, grande parte do conhecimento a cerca desses fatores tem sido obtido em modelos in vitro ou através de mutações espontâneas em ovinos. Apesar da grande relevância, a real função dos fatores oocitários na fisiologia ovariana ainda é desconhecida. O presente projeto tem por objetivo aumentar o conhecimento sobre a interação oócito-células foliculares utilizando o modelo bovino. Para isso, será utilizado o modelo de injeção intrafolicular mediada por ultrassom, através do qual será investigado o efeito do tratamento com BMP15 ou GDF9 (principais proteínas oocitárias descritas) sobre o crescimento, esteroidogênese e diferenciação de folículos em crescimento. Além disso, os fatores produzidos pelo oócito serão investigados de forma indireta, através da injeção de múltiplos complexos cumulus-oócito (CCOs) no interior de um folículo, conforme relatado na espécie equina. Em um primeiro momento, investigaremos o efeito da injeção de BMP15, GDF9 ou múltiplos CCOs nos futuros folículos dominantes ao redor da divergência. Após as injeções, será realizada dinâmica folicular para identificar o destino dos folículos tratados em comparação aos folículos controle. Posteriormente, o experimento será repetido, porém os ovários dos animais de cada grupo serão coletados 24 ou 48h após as injeções para avaliar o efeito dos fatores oocitários sobre a esteroidogênese e diferenciação das células da granulosa. A comparação do perfil proteico do fluido folicular entre folículos controle e folículos contendo múltiplos CCOs permitirá a identificação de outras proteínas produzidas pelo oócito e secretadas no ambiente folicular. Além da abordagem voltada às células da parede folicular, também avaliaremos se o ambiente folicular pré-ovulatório é capaz de manter múltiplos CCOs viáveis, com oócitos imaturos, e se a injeção intramuscular de GnRH é capaz de induzir o reinício da meiose dos oócitos injetados. Com os resultados do presente projeto pretende-se aumentar o conhecimento da função dos fatores oocitários no desenvolvimento folicular, o que impactará diretamente no entendimento da fisiopatologia ovariana bem como no campo das biotécnicas da reprodução, uma vez que a regulação destas proteínas pode promover superovulação e, paradoxalmente, contracepção.