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05/08/2019 - 05/07/2021

Ciências Biológicas - Microbiologia

A Enteropatia Proliferativa (EP) é uma doença causada pela bactéria Gram negativa e intracelular obrigatória Lawsonia intracellularis. A doença possui distribuição global e acomete animais silvestres e domésticos, apresentando maior impacto em suínos. A infecção manifesta-se de forma aguda, caracterizada por diarreia hemorrágica, levando ao rápido óbito do animal, ou crônica, causando a diminuição do crescimento e das taxas reprodutivas. A Enteropatia Proliferativa suína apresenta um impacto econômico significativo na indústria de criação de suínos e na correspondente produção mundial de carne suína, tornando relevante o desenvolvimento de vacinas eficazes para a prevenção da doença, dado que as que existem atualmente no mercado possuem limitações quanto a sua eficácia . Vacinas recombinantes utilizando antígenos específicos associados a adjuvantes podem superar as limitações das atuais vacinas. Análises de vacinologia reversa sugerem a proteína Li como potencial alvo vacinal, pois trata-se de uma proteína conservada em todas as cepas de L. intracellularis e reconhecida pelo soro de animais infectados. Dessa forma, este projeto visa desenvolver uma vacina, baseada na proteína recombinante Li de L. intracellularis fusionada à molécula adjuvante LTB ou TT-th, que promova imunidade protetora e/ou esterilizante contra a EP. A proteína recombinante será obtida através de sistema de expressão procarioto e, posteriormente, purificada por cromatografia de afinidade. Será realizada a caracterização da proteína através de ensaios de Western blot utilizando soros de suínos positivos e negativos para L. intracellularis. Ensaios in vivo, visando avaliar a capacidade da proteína de estimular resposta imune específica serão realizados em camundongos e, posteriormente, em suínos. Após a vacinação serão realizadas coletas semanais de amostras de sangue, para análises sorológicas, e de fezes, para a identificação de L. intracellularis por qPCR. A resposta imune humoral será verificada por ELISA indireto detectando a presença de anticorpos IgA, IgG e seus isotipos, enquanto que a resposta celular será caracterizada através do cultivo de esplenócitos e quantificação da transcrição de citocinas.