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02/12/2019 - 02/02/2022

Ciências Biológicas - Imunologia - Imunologia Aplicada

Probióticos são definidos como “micro-organismos vivos que quando administrados em quantidades adequadas conferem benefícios à saúde do hospedeiro”. Diversos gêneros de bactérias e leveduras são utilizados como probióticos, entretanto, os benefícios concedidos são cepa específicos, ou seja, mesmo em cepas de uma mesma espécie pode haver variações quanto aos efeitos proporcionados ao hospedeiro. Os gêneros Lactobacillus spp. e Bifdobacterium spp. são os mais amplamente estudados quanto aos seus efeitos probióticos. Os mecanismos pelos quais micro-organismos atuam no sistema imune ainda não são totalmente elucidados, tornando relevante a avalição utilizando modelos animais. Assim, o experimento tem como objetivo avaliar a cultura primária de macrófagos peritoneais obtidos de camundongos quando estimulados com bactérias do gênero Bacillus spp. Para isso, será realizada a coleta de macrófagos peritoneais de camundongos. Os animais serão eutanasiados com aproximadamente 40 dias de vida. É importante salientar que os animais não serão submetidos a nenhum tratamento in vivo. A coleta será realizada através da injeção 10 ml de PBS pela parede peritoneal ao longo do lado esquerdo do camundongo (lado do baço) e será realizado um aspirado do fluído peritoneal para coleta dos macrófagos. Todo restante do experimento será realizado in vitro. O cultivo primário de macrófagos peritoneais será submetido a diferentes estímulos. Como estímulos probióticos serão utilizadas diferentes espécies de bactérias do gênero Bacillus spp. (células vegetativas, esporos vivos e inativados, sobrenadante do cultivo de células vegetativas e DNA), como controle positivo será utilizado o mitógeno inespecífico concanavalina A (conA) e o lipopolissacarídeo LPS. Os estímulos serão deixados em contato com as células de cultivo primário por um período de 24, 48 e 72 horas. Após cada um desses períodos as células serão coletadas e será realizada a extração de RNA, síntese de DNA complementar e PCR em tempo real para avaliar a expressão de citocinas como IL-10, IL-12, IL-4 e IFN-ɣ. O objetivo desse teste é analisar, através da expressão de citocinas, a maneira como espécies de Bacillus spp. modulam a resposta imunológica. Os mesmos testes serão realizados com a linhagem celular de macrófagos RAW 264.7 e os resultados obtidos em ambos teste serão comparados a fim de verificar se existe diferença significativa (estabelecida através da utilização de métodos estatísticos) entre as duas respostas.