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13/04/2009 - 01/08/2014

Ciências Biológicas - Morfologia - Citologia e Biologia Celular

Nos últimos anos, métodos novos de vitrificação de embriões bovinos utilizando curvas de congelamento ultra-rápido têm sido pesquisados. A definição do sexo do embrião antes do processo de vitrificação é fundamental para o agrupamento e seleção de embriões sexados. O embrião produzido através de Fertilização in vitro (FIV) será biopsiado para remoção do blastômero que contém o DNA para análise do sexo que será transferido em volume para a solução tampão de PCR e proteinase K. Para a reação de PCR serão utilizados dois pares de primers simultaneamente, um específico para cromossomo Y bovino (BOV97M) e outro específico para um cromossomo autossômico (Satellite 1.715) que determina a espécie estudada. Este estudo procura avaliar também a influência do uso de três instrumentos diferentes sobre a eficiência da técnica de vitrificação de embriões bovinos produzidos in vitro. Os embriões serão submetidos a soluções de vitrificação contendo 10% Etilenoglicol (EG) + 10% Dimetil sulfóxido (DMSO) em meio de manutenção (HM) por 1 min e 20 % EG + 20% DMSO + 1,0 M sacarose em HM por 20 segundos, sendo imediatamente envasados e mergulhados em nitrogênio líquido. Os instrumentos utilizados no envase serão: OPS, Cryotop e Microloader pipette tip. Os embriões permanecerão vitrificados por 24 horas e depois serão reaquecidos em solução contendo HM + 0,25M sacarose, por 5 minutos e HM + 0,15M sacarose, por mais 5 minutos. A avaliação da taxa de re-expansão após o reaquecimento dos embriões vitrificados e da taxa de eclosão após o cultivo in vitro serão parâmetros para medir a eficiência da técnica de vitrificação por cada método utilizado. Este pacote tecnológico que envolve técnicas de biologia molecular e criobiologia permitirá o armazenamento de embriões sexados produzidos in vitro.