Nome do Projeto
Expressão gênica das células foliculares e do oviduto de fêmeas suínas estimuladas com gonadotrofinas
Ênfase
PESQUISA
Data inicial - Data final
02/09/2016 - 15/08/2019
Unidade de Origem
Área CNPq
Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Reprodução Animal
Resumo
O crescente interesse na produção in vitro de embriões suínos gerou a necessidade da padronização de protocolos que permitam a obtenção de taxas satisfatórias de desenvolvimento e viabilidade embrionária. Porém, até o momento observa-se uma baixa eficiência no processo de maturação e principalmente de fecundação monospérmica dos ovócitos obtidos a partir de ovários coletados em abatedouros. A inconsistência nas taxas de maturação está potencialmente relacionada as peculiaridades do processo de desenvolvimento folicular da espécie suína, onde o mecanismo de controle de emergência de ondas foliculares e de múltiplas ovulações é distinto do observado nas espécies monovulares. Uma vez ocorrendo uma maturação insatisfatória, o processo de fecundação in vitro é prejudicado pela dificuldade do ovócito bloquear a polispermia. Esse problema é determinado pela falta de contato com as secreções das células da parede do oviduto, que sofrem uma estreita modulação de atividade de acordo com a fase do ciclo estral. O presente projeto tem por objetivo identificar e estabelecer a regulação de genes pelas gonadotrofinas em células foliculares e do oviduto de fêmeas suínas sob diferentes perfis endócrinos, visando futuros estudos para o estabelecimento de um protocolo eficiente de fecundação in vitro. Para isso, serão utilizadas fêmeas suínas (fase final da terminação comercial), submetidas à estimulação com gonadotrofinas em diferentes momentos antes do abate. Os ovários e ovidutos de cada grupo serão coletados no frigorífico e encaminhados ao laboratório para coleta e preservação de células e fluídos necessários para identificação e quantificação de genes e proteínas envolvidas no processo de maturação ovocitária e fecundação. Com os resultados do presente projeto pretende-se aumentar o conhecimento da função dos fatores ovocitários e do oviduto sobre o processo de maturação e fecundação na espécie suína, bem como, estabelecer um modelo in vitro de suplementação hormonal para estimular células cultivadas in vitro a produzirem proteínas em níveis similares aos produzidos in vivo. Do ponto de vista aplicado, busca-se determinar um método eficiente para evitar a polispermia na fecundação in vitro de suínos e identificar possíveis mecanismos contraceptivos para aplicação em espécies monovulares.

Objetivo Geral

Geral
Avaliar a regulação da expressão de genes relacionados com o desenvolvimento dos folículos, ovulação e fecundação utilizando células da parede folicular, ovócitos e células do oviduto de fêmeas com perfil endócrino de gonadotrofinas controlado.

Específicos
• Comparar a expressão de genes relacionados à esteroidogênese, proliferação e diferenciação celular nas células de folículos antrais iniciais e pré-ovulatórios;

• Investigar a regulação da expressão de fatores produzidos por ovócitos inclusos em folículos provenientes de animais pré-púberes (anestro) e de fêmeas estimuladas com gonadotrofinas.

• Determinar a expressão das glicoproteínas do oviduto de fêmeas suínas pré-púberes não tratadas com gonadotrofinas ou em fase estrogênica inicial e tardia após tratamento com gonadotrofinas.

• Identificar genes regulados imediatamente após a ovulação nas células do oviduto na presença ou ausência de espermatozoides.

• Determinar se células de oviduto cultivadas in vitro com diferentes combinações de hormônios produzem níveis de glicoproteínas do oviduto similares aos observados in vivo.

• Determinar se ovócitos suínos em fase final de maturação expostos a meio condicionado por células secretando glicoproteínas do oviduto apresentarão zona pelúcida com maior resistência a digestão pela enzima pronase.

• Determinar a taxa de maturação nuclear e fecundação monospérmica obtida após exposição dos ovócitos ao meio condicionado por células secretando glicoproteínas do oviduto.

Equipe do Projeto

NomeCH SemanalData inicialData final
BERNARDO GARZIERA GASPERIN102/09/201615/08/2019
CRISTINA SANGOI HAAS202/09/201615/08/2019
FERNANDO CAETANO DE OLIVEIRA202/09/201615/08/2019
GEÓRGIA DA CRUZ TAVARES402/09/201615/08/2019
MONIKE QUIRINO DOS SANTOS402/09/201615/08/2019
RAFAEL GIANELLA MONDADORI102/09/201615/08/2019
SERGIO FARIAS VARGAS JÚNIOR202/09/201615/08/2019
THOMAZ LUCIA JUNIOR102/09/201615/08/2019
VERÓNICA HOYOS MARULANDA2002/09/201615/08/2019

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