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11/02/2019 - 11/02/2020

Ciências Biológicas - Imunologia - Imunologia Aplicada

As citocinas são polipeptídios ou glicoproteínas extracelulares, hidrossolúveis, atuam como mediadores celulares . Quando secretadas por células podem agir no local ou migrarem até os locais necessários, a partir de ativação de proteinoquinases. Os linfócitos, células do sistema imune, quando estimulados por citocinas podem se diferenciar em subtipos. Os linfócitos Th17 representam uma subpopulação com importantes funções efetoras na proteção contra patógenos extracelulares, visto que estas secretam principalmente interleucina 17 (IL-17). A IL-17 pertence a uma família de cinco membros que são classificadas de A-E, destaca-se a IL-17A pela sua ação pró-inflamatória, e apresenta um peso molecular de aproximadamente 35 kDa. A produção recombinante da IL-17 pode ser um importante insumo a ser utilizado na modulação da resposta imune em vacinas de subunidade. O presente trabalho tem por objetivo a expressão da IL-17 na plataforma Escherichia coli cepa RosettaTM, em fusão com tag de histidina. Após a expressão, a IL-17 será purificada por cromatografia de afinidade e avaliada seu rendimento. Sua expressão será confirmada utilizando anticorpos monoclonais anti-histidina. Em uma segunda etapa, será realizado estudo de in vitro com esplenócitos de bovinos e camundongos, os quais serão estimulados com rIL-17, afim de avaliar a integridade após a expressão. Em sequência, estudos envolvendo a coadministração de rIL-17 a vacinas de subunidade inoculadas em camundongos e bovinos. A modulação da resposta imune induzida pela rIL-17 será identificada utilizando a técnica de PCR em tempo real (qPCR) através da quantificação da expressão relativa de genes de citocinas, a partir da obtenção de cDNA de esplenócitos.