Nome do Projeto
Clonagem, expressão e caracterização da Interleucina 17A de Bos taurus em cepas de Escherichia coli
Ênfase
PESQUISA
Data inicial - Data final
11/02/2019 - 11/02/2020
Unidade de Origem
Coordenador Atual
Área CNPq
Ciências Biológicas - Imunologia - Imunologia Aplicada
Resumo
As citocinas são polipeptídios ou glicoproteínas extracelulares, hidrossolúveis, atuam como mediadores celulares . Quando secretadas por células podem agir no local ou migrarem até os locais necessários, a partir de ativação de proteinoquinases. Os linfócitos, células do sistema imune, quando estimulados por citocinas podem se diferenciar em subtipos. Os linfócitos Th17 representam uma subpopulação com importantes funções efetoras na proteção contra patógenos extracelulares, visto que estas secretam principalmente interleucina 17 (IL-17). A IL-17 pertence a uma família de cinco membros que são classificadas de A-E, destaca-se a IL-17A pela sua ação pró-inflamatória, e apresenta um peso molecular de aproximadamente 35 kDa. A produção recombinante da IL-17 pode ser um importante insumo a ser utilizado na modulação da resposta imune em vacinas de subunidade. O presente trabalho tem por objetivo a expressão da IL-17 na plataforma Escherichia coli cepa RosettaTM, em fusão com tag de histidina. Após a expressão, a IL-17 será purificada por cromatografia de afinidade e avaliada seu rendimento. Sua expressão será confirmada utilizando anticorpos monoclonais anti-histidina. Em uma segunda etapa, será realizado estudo de in vitro com esplenócitos de bovinos e camundongos, os quais serão estimulados com rIL-17, afim de avaliar a integridade após a expressão. Em sequência, estudos envolvendo a coadministração de rIL-17 a vacinas de subunidade inoculadas em camundongos e bovinos. A modulação da resposta imune induzida pela rIL-17 será identificada utilizando a técnica de PCR em tempo real (qPCR) através da quantificação da expressão relativa de genes de citocinas, a partir da obtenção de cDNA de esplenócitos.

Objetivo Geral

• Amplificar a sequência completa do gene da interleucina 17A e cloná-la em vetor pAE;
• Expressão da IL-17A em cepa de E. coli;
• Avaliação do rendimento na expressão em diferentes cepas;
• Otimização do tempo de indução da expressão;
• Caracterização da proteína recombinante;
• Avaliação da sinalização;
• Avaliação do efeito modulador na resposta imune

Equipe do Projeto

NomeCH SemanalData inicialData final
ALCEU GONÇALVES DOS SANTOS JUNIOR110/08/201710/02/2019
ALINE SITOWSKI1201/08/201831/07/2019
FRANCISCO DENIS SOUZA SANTOS110/08/201710/02/2019
RENAN EUGÊNIO ARAUJO PIRAINE110/08/201710/02/2019
RODRIGO CASQUERO CUNHA110/08/201710/02/2019
VITÓRIA SEQUEIRA GONÇALVES1010/08/201710/02/2019
YAGO PIRES1201/01/201931/07/2019

Página gerada em 02/07/2022 08:41:30 (consulta levou 0.078807s)