Nome do Projeto
Efeito do FSH recombinante bovino no ambiente folicular equino
Ênfase
Pesquisa
Data inicial - Data final
01/10/2025 - 31/12/2028
Unidade de Origem
Coordenador Atual
Área CNPq
Ciências Agrárias
Resumo
O uso de FSH beneficia o desenvolvimento folicular e aumenta o número de CCOs obtidos em bovinos e humanos (Hayden et al., 2023). Resultados presentes na literatura apontam que o número de projeções transzonais está diretamente associado com a qualidade ovocitária, e que essas estão envolvidas no transporte de moléculas entre as células do cumulus e o ovócito. A comunicação bidirecional entre as células do cumulus e ovócito é essencial para a troca de moléculas reguladoras e metabólitos que contribuem para a aquisição da competência ovocitária, necessária para o desenvolvimento embrionário inicial. Uma das formas de comunicação é por projeções transzonais (PTZs), que são projeções de membrana do tipo filopodia, elas atravessam a zona pelúcida em direção à membrana do ovócito, com as quais se comunicam por junções do tipo gap ou por emissão de microvesículas (Clarke, 2018). No sistema de maturação in vitro (MIV), essa comunicação é interrompida de forma prematura devido à ausência de fatores produzidos pela granulosa mural, resultando em menor qualidade dos ovócitos maturados in vitro. Dados preliminares demostraram que a retração in vitro das PTZs em complexo cumulus-oócito (CCOs) bovinos pode ocorrer, mesmo com a suplementação de moléculas produzidas pelas células da granulosa, em função dos estágios de vesícula germinativa (GV) dos ovócitos. Esses resultados sugerem que o estágio de desenvolvimento do ovócito interfere na manutenção das PTZs no sistema in vitro. A manipulação hormonal da onda folicular pode ser empregada para enriquecer uma determinada população de GV nos CCOs recuperados (Soares, Marques, et al., 2020; Soares, Sakoda, et al., 2020). Entretanto, dosagens suprafisiológicas de FSH, que comumente são utilizadas nesses protocolos de superestimulação, podem afetar a integridade e PTZs e junções gap (Luciano et al., 2011), a estabilidade de citoesqueleto e de fuso meiótico, resultando em anomalias cromossomais e aneuploidia (revisado por Buratini et al., 2021). A alteração dessa comunicação celular também pode influenciar no perfil de transcritos dos ovócitos e dos embriões originados desses ovócitos. Diante disso, alternativas que empregam dosagens menores de FSH podem ser uma melhor opção nesse cenário, minimizando os efeitos negativos desse hormônio sobre a qualidade de CCOs destinados aos sistemas de PIVE. Pouco se sabe sobre os efeitos do tratamento com FSH previamente a aspiração folicular em equinos. Por serem animais monovulatórios, e com características de crescimento folicular semelhante a humanos, acredita-se que o uso do FSHr nessa espécie possa trazer benefícios para a qualidade dos ovócitos e número de embriões produzidos. Portanto, a compreensão dos efeitos causados pelo uso do FSHr na espécie equina poderia determinar a viabilidade do tratamento com FSHr bovino na rotina de produção de embriões equinos in vitro.
Objetivo Geral
Avançar no conhecimento do efeito do FSH no ambiente folicular de éguas.
Justificativa
No que se refere aos impactos no setor produtivo, o presente estudo se justifica pela possibilidade de obter aumento na taxa de desenvolvimento embrionário in vitro, o que possibilitará a obtenção de maior número de
descendentes de fêmeas geneticamente superiores, com menor número de procedimentos. O presente projeto, pelas análises moleculares a serem realizadas, também avançará na fronteira do conhecimento da
pesquisa básica. O aumento da qualidade ovocitária também possibilitará encurtar o intervalo entre gerações, considerando que se espera um incremento significativo na produção embrionária. Além disso, o conhecimento gerado pode fornecer subsídios para a produção de embriões de outras espécies monovulares, como bovinos e humanos.
descendentes de fêmeas geneticamente superiores, com menor número de procedimentos. O presente projeto, pelas análises moleculares a serem realizadas, também avançará na fronteira do conhecimento da
pesquisa básica. O aumento da qualidade ovocitária também possibilitará encurtar o intervalo entre gerações, considerando que se espera um incremento significativo na produção embrionária. Além disso, o conhecimento gerado pode fornecer subsídios para a produção de embriões de outras espécies monovulares, como bovinos e humanos.
Metodologia
O presente estudo irá avaliar o efeito do tratamento com FSHr no número e a qualidade dos ovócitos obtidos por aspiração folicular em comparação com éguas não tratadas. Considerando que não há estudos similares em equinos, para fins de cálculo do “n” amostral foi utilizado como referência o estudo de Hayden et al., (2023), que obteve aumento de, aproximadamente, dois ovócitos viáveis a após tratamento gonadotrofina em fêmeas bovinas. Portanto, será considerada a diferença esperada no número de ovócitos obtidos e o desvio padrão, conforme cálculo abaixo. O cálculo do “n” amostral foi realizado com o software JMP PRO 16 SAS.
Após exame ginecológico inicial as éguas aptas passarão por monitoramento ultrassonográfico semanal dos ovários para quantificação e mensuração de população e crescimento folicular. Nesse estudo, serão
utilizadas éguas em anestro. Conforme descrito na Figura 1, as éguas serão alocadas em dois grupos:
Controle (n=12), éguas não tratadas; ou FSHr (n=12), éguas tratadas com 150 µg de ripafolitropina alfa
bovina (FSHr) no D0. Será realizada avaliação da dinâmica de crescimento folicular, por ultrassonografia
transretal (transdutor linear de 5 a 7,5MHz; A5V, SonoScape) após a remoção das fezes e lubrificação do
reto (5 ml de carboximetilcelulose). As avaliações serão realizadas diariamente até o D3, quando será
realizada a aspiração folicular. Nos momentos de avaliação ultrassonográfica será realizada uma coleta de
sangue (4 ml) de cada animal (total = 96 amostras). Os ovócitos serão aspirados de folículos com
aproximadamente 8 a 10 mm de diâmetros (Bols & Stout, 2018). O procedimento será realizado com o
animal em estação e em tronco de contenção específico, após jejum sólido de 12 h.
Após exame ginecológico inicial as éguas aptas passarão por monitoramento ultrassonográfico semanal dos ovários para quantificação e mensuração de população e crescimento folicular. Nesse estudo, serão
utilizadas éguas em anestro. Conforme descrito na Figura 1, as éguas serão alocadas em dois grupos:
Controle (n=12), éguas não tratadas; ou FSHr (n=12), éguas tratadas com 150 µg de ripafolitropina alfa
bovina (FSHr) no D0. Será realizada avaliação da dinâmica de crescimento folicular, por ultrassonografia
transretal (transdutor linear de 5 a 7,5MHz; A5V, SonoScape) após a remoção das fezes e lubrificação do
reto (5 ml de carboximetilcelulose). As avaliações serão realizadas diariamente até o D3, quando será
realizada a aspiração folicular. Nos momentos de avaliação ultrassonográfica será realizada uma coleta de
sangue (4 ml) de cada animal (total = 96 amostras). Os ovócitos serão aspirados de folículos com
aproximadamente 8 a 10 mm de diâmetros (Bols & Stout, 2018). O procedimento será realizado com o
animal em estação e em tronco de contenção específico, após jejum sólido de 12 h.
Indicadores, Metas e Resultados
O aprimoramento da produção in vitro poderá impactar positivamente na multiplicação de éguas atletas que,
na maioria das vezes, apresentam idade avançada e, consequentemente, menor fertilidade. Ainda, o aumento
na qualidade ovocitária pode possibilitar o desenvolvimento de embriões in vitro mais similares aos obtidos in vivo. Assim, espera-se reduzir significativamente as perdas gestacionais e neonatais. É importante ressaltar que a espécie equina representa um relevante modelo experimental para humanos, ou seja, os dados gerados podem fornecer subsídios para o aprimoramento da produção in vitro de embriões em humanos
na maioria das vezes, apresentam idade avançada e, consequentemente, menor fertilidade. Ainda, o aumento
na qualidade ovocitária pode possibilitar o desenvolvimento de embriões in vitro mais similares aos obtidos in vivo. Assim, espera-se reduzir significativamente as perdas gestacionais e neonatais. É importante ressaltar que a espécie equina representa um relevante modelo experimental para humanos, ou seja, os dados gerados podem fornecer subsídios para o aprimoramento da produção in vitro de embriões em humanos
Equipe do Projeto
| Nome | CH Semanal | Data inicial | Data final |
|---|---|---|---|
| ARNALDO DINIZ VIEIRA | 4 | ||
| BERNARDO GARZIERA GASPERIN | 2 | ||
| BRUNA DA ROSA CURCIO | 4 | ||
| FABIANE PEREIRA DE MORAES | |||
| GUSTAVO DESIRÉ ANTUNES GASTAL | 6 | ||
| HELENA LEITES FREITAS | |||
| ISADORA PAZ OLIVEIRA DOS SANTOS | |||
| NATÁLIA AVILA DE CASTRO | |||
| PALOMA BEATRIZ JOANOL DALLMANN | |||
| PEDRO HOLZ DUMMER | |||
| RAFAEL GIANELLA MONDADORI | 4 | ||
| SERGIO FARIAS VARGAS JÚNIOR | |||
| TATIANE LEITE ALMEIDA | |||
| TATIANE LEITE ALMEIDA | |||
| THAIS LOPES PUCINELLI | |||
| THOMAZ LUCIA JUNIOR | 1 |
Fontes Financiadoras
| Sigla / Nome | Valor | Administrador |
|---|---|---|
| CNPq / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico | R$ 1.500.000,00 | Coordenador |
| FAPERGS / Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado Rio Grande do Sul | R$ 1.000.000,00 | Coordenador |
| PROAP/CAPES / Coordenação de Aperfeiçoamento de Nível Superior | R$ 10.000,00 | Coordenador |
Plano de Aplicação de Despesas
| Descrição | Valor |
|---|---|
| 339033 - Passagens de Despesas de Locomoção | R$ 100.000,00 |
| 339030 - Material de Consumo | R$ 1.010.000,00 |
| 339018 - Auxílio Financeiro a Estudantes | R$ 900.000,00 |
| 339039 - Outros Serviços de Terceiro - Pessoa Jurídica | R$ 500.000,00 |