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O aumento dos casos de neoplasias em animais domésticos são um problema crescente na prática veterinária, e importantes causas de morte nas diversas espécies, especialmente caninos e felinos (Salvador, 2010).
No Brasil, um estudo realizado na região metropolitana de São Paulo apontou as neoplasias como a segunda principal causa de morte em cães, representando 13,28% (Bentubo et al., 2007). No sul do país, na Mesorregião do Centro Ocidental Rio-Grandense, 7,8% dos cães morreram ou foram submetidos à eutanásia por apresentarem complicações relacionadas a neoplasmas (Figueira et al., 2008).
Em estudo realizado na região Sul do Brasil as neoplasias representaram 2,22% das doenças na espécie bovina, 1,41% em ovinos, 8,39% em equinos e 0,6% em suínos. Em todos os casos estudados o sistema mais comprometido foi o tegumentar (Ramos et al., 2008).
As neoplasias são uma das principais causas de morte em cães com mais de 10 anos, acometendo 50% destes. Dos cães afetados, em torno de 25% morrem devido à doença (Adams et al., 2010). Estima-se que 30% e 20% do total de neoplasias diagnosticadas em cães e gatos, respectivamente, sejam de origem cutânea (Scott et al., 2001). A pele é um órgão propício à ocorrência de neoplasias em virtude do seu alto índice de renovação celular que eleva o número de mutações comparadas com outros tecidos (Murphy, 2006).
O grande número de informações acerca da biologia tumoral de diferentes tipos neoplásicos em cada espécie exige um diagnóstico mais cuidadoso, abrangendo características celulares e moleculares que vão além da definição de malignidade (Ramos-Vara et al., 2008). O diagnóstico dos diversos tipos de neoplasia na clínica veterinária tem se tornando cada vez mais importante, já que cada tipo de neoplasia responde a um tratamento específico (Withrow et al., 2013).
O diagnóstico morfológico em medicina veterinária é baseado principalmente em colorações de rotina, como hematoxilina e eosina e, menos frequentemente, por outras colorações histoquímicas. No entanto, o nível de especialização e as exigências veterinárias de diagnósticos mais precisos, em particular para os tumores, têm despertado a necessidade de implementar técnicas auxiliares de diagnóstico (Silva et al., 2015).
A imuno-histoquímica (IHC) é uma ferramenta importante na caracterização de doenças neoplásicas em seres humanos e tornou-se igualmente importante na medicina veterinária. A técnica mostra-se importante na rotina diagnóstica para a identificação dos diferentes tipos histológicos e de fatores prognósticos, direcionando os animais afetados para tratamento adequado, além de identificar os tumores com maior risco de recidiva e evolução fatal (Capelozzi, 2009). O número de testes de IHC oferecidos pelos laboratórios veterinários de diagnósticos para o diagnóstico de neoplasias aumentou exponencialmente na última década (Ramos-Vara et. al, 2008).
As possibilidades para utilização da técnica imuno-histoquímica em oncologia veterinária são ilimitadas. A avaliação da proliferação celular, angiogênese, expressão de COX-2 e outros marcadores celulares representam fatores prognósticos e preditivos para inúmeros processos neoplásicos (Horta et al., 2012).
Além da IHC, nos últimos anos a genética e a biologia molecular tem contribuído e alterado o conhecimento sobre a biologia dos tumores (Avery et al., 2013). Grande parte dos conhecimentos em relação à biologia das neoplasias está direcionada aos humanos, tornando necessária a compreensão mais abrangente na área da medicina veterinária (Richardson et al., 1997). O diagnóstico molecular em oncologia tem sido utilizado na detecção de mutações somáticas, alterações gênicas ou expressão proteica que podem alterar o diagnóstico, prognóstico e a terapia dos animais com neoplasias (Engstrom et al., 2011).
As mutações podem ocorrer em qualquer uma das etapas de crescimento e diferenciação celular. O acúmulo destas mutações é que pode resultar na desregulação progressiva do crescimento e originar uma célula tumoral. De modo geral, as mutações de genes específicos se acumulam em células somáticas e perdem um número essencial de mecanismos de controle de crescimento, dando inicio a formação do tumor (Jorde et al., 2000).
Os objetivos do presente projeto são fazer um estudo comparativo sobre os métodos de diagnóstico das neoplasias observadas nas diversas espécies domésticas utilizando a histoquímica e a imuno-histoquímica e estabelecer protocolos de segurança e economicamente viáveis para implantação na rotina do laboratório. Objetiva-se, também, estudar através da análise de polimorfismos genéticos os tumores de mama mais frequentemente diagnosticados em caninos.

3.1. Área de estudo
Serão avaliados materiais (biopsias ou necropsias) remetidos entre 2000-2015.ao LRD/UFPEL por veterinários da região sul do Rio Grande do Sul, que compreende 22 municípios.

3.2. Levantamento das neoplasias das espécies domésticas nos arquivos do LRD entre 2000-2015 e classificação histológica
Será realizado um levantamento das neoplasias diagnosticadas no LRD/UFPEL, no período de 2000 a 2015. Para isso serão revisados nos arquivos do LRD os protocolos de necropsias realizadas no laboratório ou a campo e/ou materiais remetidos por veterinários ao laboratório. Serão resgatadas informações referentes ao diagnóstico, patologia macroscópica e histológica das necropsias e biópsias/órgãos.
Inicialmente, as amostras serão divididas em neoplásicas e não-neoplásicas, de acordo com o diagnóstico histopatológico. Os dados epidemiológicos de cada caso referentes aos animais afetados serão agrupados e analisados. Os casos selecionados terão suas características histológicas reavaliadas, sem alteração do diagnóstico final. Quando for necessário o material será novamente clivado e corado pelas técnicas de rotina. O estudo morfológico das neoplasias será efetuado e a classificação histológica dos tumores será baseada na Classificação Histológica de Tumores de Animais Domésticos da Organização Mundial da Saúde (OMS).

3.3. Imuno-histoquímica
No acervo do LRD será efetuada buscas dos blocos de parafinas referentes às neoplasias selecionadas. A confecção das lâminas será efetuada de modo a garantir a melhor seleção das áreas afetadas e o menor dano ao bloco original.
As amostras serão submetidas à técnica de IHQ. Os cortes serão desparafinizados, reidratados em bateria de álcoois e xilóis, e lavados com solução PBS (pH 7,2). A recuperação antigênica será efetuada utilizando-se soluções de citrato 2mM, (pH 6,0), em microondas por 15 minutos em potência máxima. Após, receberam tratamento com solução de peróxido de hidrogênio 0,1% por 10 minutos para bloqueio da peroxidase endógena.
Posteriormente serão definidos os anticorpos necessários para cada caso. Os anticorpos a serem testados deverão ter imunógenos conhecidos.

• Implementar a técnica de imuno-histoquímica na rotina do LRD/UFPel para as neoplasias mais frequentemente diagnosticadas;
• estabelecer protocolos de uso da imuno-histoquímica economicamente viáveis;
• contribuir para o conhecimento das neoplasias de maior ocorrência nas espécies domésticas na região sul do Rio Grande do Sul, bem como difundir informações e auxiliar médicos veterinários a direcionar os animais para tratamento adequado, além de identificar os tumores com maior risco de recidiva e evolução fatal;
• publicar trabalhos em congresso na área de patologia e trabalhos em revistas científicas classificadas como Qualis A2 e B1.