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A funcionalidade do fígado é extremamente importante para que funções orgânicas essenciais sejam exercidas. Ele atua no controle de atividades fisiológicas, bioquímicas, desintoxicação de xenobióticos e no combate contra o desenvolvimento de infecções (Lima et al., 2019; Mahmood et al., 2014). As hepatopatias tais como as lesões hepáticas induzidas por medicamentos, hepatites virais e não-virais, câncer de fígado, doenças hepáticas associadas ao consumo de drogas de abuso, dentre outras, ainda são um problema persistente, e os medicamentos existentes para minimizar esses danos apresentam efeitos colaterais indesejados como insônia, vômito, constipação e depressão (Mahmood et al., 2014).
O desenvolvimento de algumas dessas patologias hepáticas está associado ao estresse oxidativo, processo onde ocorre um desequilíbrio de agentes oxidantes e agentes antioxidantes (Zhu, Wang, Zhang, & Guo, 2012). O selênio é um elemento presente em diversos alimentos e se apresenta compondo enzimas antioxidantes e regulando a ação de radicais livres e outras espécies reativas. Estudos propõem que a ação deste elemento auxilie na integridade da membrana celular e reduza danos oxidativos em biomoléculas como lipoproteínas e DNA (Rayman, 2000). Estudos demonstram o potencial hepatoprotetor do selênio em indivíduos infectados pelo vírus da hepatite (B ou C) e contra a progressão de câncer no fígado e pesquisas comprovam o efeito protetor contra lesões hepáticas, renais, gástricas, atividade antioxidante e neuroprotetora em vários modelos biológicos (Rayman, 2000; Rosa, Roesler, Braga, Saffi, & Henriques, 2007).
Compostos orgânicos de selênio englobam uma variedade de produtos naturais com atividade farmacológica. Estes compostos estão sendo cada vez mais explorados, de forma a avaliar seu potencial antioxidante, ansiolítico, antidepressivo e hepatoprotetor (Nogueira & Rocha, 2011). Nosso grupo de pesquisa tem investigado a atividade farmacológica de uma classe de compostos 3-organoselenil benzofuranos (SeBZFs). A sua atividade antioxidante em cérebro de camundongo in vitro já foi relatada (Gall et al., 2020). Além disso, dados ainda não publicados demonstraram que estes compostos também atuam como antioxidantes em tecido hepático in vitro.
Desta forma, torna-se relevante aprofundar os estudos dos efeitos terapêuticos dos SeBZFs, compostos híbridos contendo o núcleo benzofurano e selênio em sua estrutura, analisando neste projeto o seu potencial hepatoprotetor frente a uma lesão hepática induzida pela ação de paracetamol em roedores.

Será realizado um protocolo de indução do dano hepático em camundongos swiss machos, onde o dano será induzido através da administração da dose de 300 mg/kg de paracetamol (acetaminofeno) por meio da via intraperitoneal (i.p.). Animais que servirão de controle receberão apenas salina. A administração de paracetamol será realizada apenas uma vez, onde também serão submetidos a um jejum prévio de 16 horas (Mossanen & Tacke, 2015; Pu et al., 2019).
O protocolo seguinte para a investigação dos efeitos terapêuticos da administração oral de dois compostos SeBZF em um modelo de dano hepático induzido por paracetamol em camundongos. Serão testados dois compostos com potencial perfil antioxidante in vitro (aqui citados genericamente como SeBZFs A e B). Os camundongos serão pesados e separados em 11 grupos contendo 13 animais cada. O óleo de canola será utilizado como veículo dos SeBZFs, o controle positivo será a administração única da dose de N-acetilcisteína (forma acetilada do aminoácido cisteína que possui alto potencial antioxidante).
Grupo I – Controle: receberá salina (i.p.) e óleo de canola (v.o.);
Grupo II – SeBZFA: receberá salina (i.p.) e 50 mg/kg de SeBZFA (v.o.) per se
Grupo III – SeBZFA: receberá salina (i.p.) e 100 mg/kg de SeBZFA (v.o.) per se
Grupo IV – SeBZFB: receberá salina (i.p.) e 50 mg/kg de SeBZFB (v.o.) per se
Grupo V – SeBZFB: receberá salina (i.p.) e 100 mg/kg de SeBZFB (v.o.) per se
Grupo VI – Paracetamol (induzido): receberá paracetamol 300 mg/kg (i.p.) e óleo de canola (v.o.)
Grupo VII – Paracetamol + SeBZFA: receberá paracetamol 300 mg/kg (i.p.) e SeBZFA 50 mg/kg (v.o.)
Grupo VIII – Paracetamol + SeBZFA: receberá paracetamol 300 mg/kg (i.p.) e SeBZFA 100 mg/kg (v.o.)
Grupo IX – Paracetamol + SeBZFB: receberá paracetamol 300 mg/kg (i.p.) e SeBZFB 50 mg/kg (v.o.)
Grupo X - Paracetamol + SeBZFB: receberá paracetamol 300 mg/kg (i.p.) e SeBZFB 100 mg/kg (v.o.)
Grupo XI – Paracetamol + controle positivo: receberá paracetamol 300 mg/kg (i.p.) e N-cetilcisteína 300 mg/kg (v.o.)
O intervalo entre a indução e os tratamentos será de 2 horas. Então 24 horas após a indução, os animais serão anestesiados com isoflurano para a coleta de sangue por punção cardíaca e análises bioquímicas para determinação de AST, ALT, ϒ-GT, ALP serão realizadas. Será realizada a retirada de amostras de fígado para que seja realizada análise histológica e também a determinação de parâmetros de dano oxidativo (níveis de lipoperoxidação, proteína carbonilada e de espécies reativas).

O protocolo para investigação dos efeitos preventivos de um pré-tratamento oral e repetido com SeBZF frente ao dano hepático induzido por paracetamol em camundongos. Será escolhido apenas 1 dentre os 2 compostos aqui citados como SeBZFA e B, sendo o escolhido o mais promissor no protocolo anterior. Neste protocolo os camundongos serão divididos em 7 grupos contendo 13 animais cada:
Grupo I – Controle: receberá óleo de canola (v.o.) e salina (i.p.)
Gupo II – SeBZFX 5 mg/kg per se (v.o.) + salina (i.p.)
Grupo III - SeBZFX 25 mg/kg per se (v.o.) + salina (i.p.)
Grupo IV – Paracetamol (induzido): receberá óleo de canola (v.o.) + paracetamol 300 mg/kg (i.p.)
Grupo V – Paracetamol + SeBZFX 5 mg/kg (v.o.) + paracetamol 300 mg/kg (i.p.)
Grupo VI - Paracetamol + SeBZFX 25 mg/kg (v.o.) + paracetamol 300 mg/kg (i.p.)
Grupo VII – Controle positivo: N-acetilcisteína 150 mg/kg + paracetamol 300 mg/kg (i.p.)
O tratamento será realizado durante 7 dias consecutivos, também se utilizarão doses mais baixas do composto SeBZF devido o tratamento ser repetido, ser mais lipossolúvel e ter sua permanência favorecida no organismo, havendo uma possível somação das doses. Em um estudo ainda não publicado, a administração repetida destas doses não causou aparente toxicidade em camundongos (Besckow et al., 2020; Gall et al., 2020). Então após a ultima administração do composto SeBZFX ou N-acetilcisteína, os animais passaram por um jejum de 16 horas, para que haja uma indução do dano hepático por paracetamol (Mossanen & Tacke, 2015; Pu et al., 2019). Após 24 horas os animais serão eutanasiados com isoflurano, e sangue e fígado serão coletados e utilizados para análise.

Espera-se com este projeto indicar uma nova molécula com potencial hepatoprotetor, principalmente frente ao dano induzido por paracetamol, visto que é um medicamento de uso livre e muito consumido por pessoas de diversas idades. Espera-se que os resultados sejam satisfatórios, e que se possa ter uma melhor exploração pré-clínica adicional, a fim de se contribuir para o desenvolvimento de novos fármacos que apresentem menos efeitos adversos.