Nome do Projeto
Efeito de leveduras probióticas em ovinos infectados por Haemonchus contortus
Ênfase
Pesquisa
Data inicial - Data final
01/05/2021 - 01/05/2024
Unidade de Origem
Coordenador Atual
Área CNPq
Ciências Biológicas
Resumo
O sucesso da ovinocultura está diretamente ligado à ampla difusão e adaptação da espécie a diferentes climas, vegetações e relevos. No entanto a produção de ovinos apresenta diversos entraves, dentre eles as nematodioses gastrintestinais, destacando-se por sua patogenia e hegemonia a Haemoncose, causada pelo nematoide Haemonchus contortus. O manejo sanitário dos rebanhos baseia-se no uso de anti-helmínticos, no entanto, o uso indiscriminado destes fármacos tem induzido o desenvolvimento de resistência dos parasitos à maioria das moléculas disponíveis no mercado.
Este experimento tem o objetivo de avaliar o efeito de leveduras probióticas em ovinos infectados por Haemonchus contortus. Idealizou-se usar ovinos infectados, divididos em: grupo controle (G1) – controle não tratado: ovinos parasitados que receberão apenas placebo, Grupo 2 (G2) – ovinos parasitados, suplementados com Saccharomyces cerevisiae, Grupo 3 (G3) - ovinos parasitados, suplementados com Saccharomyces boulardii , Grupo 4 (G4) – ovinos parasitados, suplementados com Pichia pastoris. O probiótico será administrado via oral, na concentração mínima de 1x107 UFC/ml. Proceder com coletas diárias de fezes para realização de OPG (Gordon & Whitlock 1939), e coprocultura (Roberts & O’Sullivan 1950), e coletas semanais de sangue para quantificação de imunoglobulinas, e microhematócrito.
Levando-se em consideração os inúmeros casos de resistência às moléculas disponíveis no mercado, e os prejuízos causados a ovinocultura, sejam estes diretos, com a morte de animais, ou indiretos, como gastos com antiparasitários. É importante a busca de medidas alternativas, que possibilitem a redução de uso de anti-helmínticos no controle das parasitoses gastrointestinais de ovinos.
Objetivo Geral
Analisar a viabilidade da utilização de probióticos como ferramenta auxiliar no controle da hemoncose em ovinos.
Justificativa
Buscar medidas alternativas, que possibilitem a redução do uso de anti-helmínticos no controle das parasitoses gastrointestinais de ovinos.
Metodologia
Para a realização do experimento serão utilizados ovinos até 12 meses, provenientes do Centro Agropecuário da Palma. Os animais serão divididos em quatro grupos e permanecerão a campo, separados em quatros piquetes, com intuito de minimizar o stress causado aos animais. Ambos os grupos terão acesso à água, a área escolhida
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para o experimento é composta por campo nativo melhorado com leguminosas, e gramíneas. O grupo 1 (G1) – controle não tratado: ovinos parasitados os que receberão apenas placebo, Grupo 2 (G2) – ovinos parasitados, suplementados com Saccharomyces cerevisiae, Grupo 3 (G3) - ovinos parasitados, suplementados com Saccharomyces boulardii , Grupo 4 (G4) – ovinos parasitados, suplementados com Pichia pastoris.
Antes de iniciar o experimento, os animais permanecerão trinta dias em adaptação a nova dieta e ambiente. Durante esse período será realizado o acompanhamento do nível de parasitismos do rebanho através da técnica de Gordon & Whitlock – OPG, caso se mostre necessário os animais receberão anti - helmínticos. Serão avaliados: Parâmetros parasitológicos - A coleta de fezes será realizada sete dias antes do inicio do experimento, diariamente, e sete dias após o termino do experimento. O material será coletado diretamente da ampola retal, armazenado em sacos plásticos e refrigerado para a realização da técnica de contagem de ovos por gramas de fezes – OPG (Gordon & Whitlock 1939), as mesmas amostras serão utilizadas para a recuperação de larvas infectantes pela técnica de coprocultura (Roberts & O’Sullivan 1950). Parâmetros sanguíneos e imunológicos - Os parâmetros imunológicos serão avaliados a partir do sangue coletado dos animais através da venopunção da veia jugular no 7°, 14°, e 28° dia de experimento, armazenado em tubos estéreis com EDTA e sem anticoagulante, e mantidos sob refrigeração. Os tubos sem anticoagulante serão centrifugados para obtenção do soro sanguíneo, que será armazenado em microtubos de 1,5 ml a -20°C para posterior análise. O objetivo será avaliar o percentual de células vermelhas através de microhematócrito, e quantificar anticorpos presentes no soro dos animais submetidos aos diferentes tratamentos.
Obtenção e administração das leveduras: As leveduras utilizadas neste estudo serão oriundas do banco de matérias do Centro de Biotecnologia da Universidade Federal de Pelotas (UFPel), Brasil. As culturas serão realizadas no Laboratório de Parasitologia molecular e imunologia aplicada no Departamento de Microbiologia e Parasitologia do Instituto de Biologia -UFPel. As leveduras devem ser semeadas e multiplicadas em meio liquido YPD (yeast extract, peptone dextrose) solidificado com 2% de ágar (Difco)
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e incubada por 72 horas/28 ◦C. As leveduras serão repicadas em meio YPD líquido e permanecerão a temperatura de 28°C e agitação de 250 RPM, durante 72 horas. Após os três dias realizar a contagem em unidades formadoras de colônia (UFC), e armazenamento do cultivo em frascos âmbar a 4°C até a sua utilização. Esses probióticos serão administrados aos animais por via oral, diariamente, contendo 1x107 UFCs/ml.
Obtenção dos animais – Os ovinos selecionados para o experimento fazem parte do rebanho da Universidade Federal de Pelotas. Animais até um ano de idade, expostos as condições ambientais e infectados.
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para o experimento é composta por campo nativo melhorado com leguminosas, e gramíneas. O grupo 1 (G1) – controle não tratado: ovinos parasitados os que receberão apenas placebo, Grupo 2 (G2) – ovinos parasitados, suplementados com Saccharomyces cerevisiae, Grupo 3 (G3) - ovinos parasitados, suplementados com Saccharomyces boulardii , Grupo 4 (G4) – ovinos parasitados, suplementados com Pichia pastoris.
Antes de iniciar o experimento, os animais permanecerão trinta dias em adaptação a nova dieta e ambiente. Durante esse período será realizado o acompanhamento do nível de parasitismos do rebanho através da técnica de Gordon & Whitlock – OPG, caso se mostre necessário os animais receberão anti - helmínticos. Serão avaliados: Parâmetros parasitológicos - A coleta de fezes será realizada sete dias antes do inicio do experimento, diariamente, e sete dias após o termino do experimento. O material será coletado diretamente da ampola retal, armazenado em sacos plásticos e refrigerado para a realização da técnica de contagem de ovos por gramas de fezes – OPG (Gordon & Whitlock 1939), as mesmas amostras serão utilizadas para a recuperação de larvas infectantes pela técnica de coprocultura (Roberts & O’Sullivan 1950). Parâmetros sanguíneos e imunológicos - Os parâmetros imunológicos serão avaliados a partir do sangue coletado dos animais através da venopunção da veia jugular no 7°, 14°, e 28° dia de experimento, armazenado em tubos estéreis com EDTA e sem anticoagulante, e mantidos sob refrigeração. Os tubos sem anticoagulante serão centrifugados para obtenção do soro sanguíneo, que será armazenado em microtubos de 1,5 ml a -20°C para posterior análise. O objetivo será avaliar o percentual de células vermelhas através de microhematócrito, e quantificar anticorpos presentes no soro dos animais submetidos aos diferentes tratamentos.
Obtenção e administração das leveduras: As leveduras utilizadas neste estudo serão oriundas do banco de matérias do Centro de Biotecnologia da Universidade Federal de Pelotas (UFPel), Brasil. As culturas serão realizadas no Laboratório de Parasitologia molecular e imunologia aplicada no Departamento de Microbiologia e Parasitologia do Instituto de Biologia -UFPel. As leveduras devem ser semeadas e multiplicadas em meio liquido YPD (yeast extract, peptone dextrose) solidificado com 2% de ágar (Difco)
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e incubada por 72 horas/28 ◦C. As leveduras serão repicadas em meio YPD líquido e permanecerão a temperatura de 28°C e agitação de 250 RPM, durante 72 horas. Após os três dias realizar a contagem em unidades formadoras de colônia (UFC), e armazenamento do cultivo em frascos âmbar a 4°C até a sua utilização. Esses probióticos serão administrados aos animais por via oral, diariamente, contendo 1x107 UFCs/ml.
Obtenção dos animais – Os ovinos selecionados para o experimento fazem parte do rebanho da Universidade Federal de Pelotas. Animais até um ano de idade, expostos as condições ambientais e infectados.
Indicadores, Metas e Resultados
Buscar alternativas para o controle de H. contortus, promovendo condições para que os animais possam expressar suas características genéticas atendendo sua finalidade na cadeia produtiva.
Almeja - se otimizar a resposta imunológica e sistêmica dos ovinos suplementados com S. cerevisiae, S. boulardii e P. pastoris.
Espera-se reduzir o número de ovos de H. contortus por grama de fezes, diminuindo a necessidade do uso de anti-helmínticos.
Almeja - se otimizar a resposta imunológica e sistêmica dos ovinos suplementados com S. cerevisiae, S. boulardii e P. pastoris.
Espera-se reduzir o número de ovos de H. contortus por grama de fezes, diminuindo a necessidade do uso de anti-helmínticos.
Equipe do Projeto
| Nome | CH Semanal | Data inicial | Data final |
|---|---|---|---|
| FABIO PEREIRA LEIVAS LEITE | 1 | ||
| FRANCISCO DENIS SOUZA SANTOS | |||
| JÉFERSON VIDART RAMOS | |||
| NATÁLIA BERNE PINTO | |||
| NEIDA LUCIA CONRAD | |||
| PAMELA ARISTIMUNHO SEDREZ | |||
| VITÓRIA MÜLLER |