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A brucelose é uma das principais doenças causadores de aborto nos animais. A principal fonte de transmissão da Brucella spp para o homem são animais doentes. O estudo visa identificar plantas medicinais que tenham efeito sobre bactérias do gênero Brucella spp, cujos princípios ativos poderiam ser utilizados futuramente para o tratamento de brucelose em animais, impactando na transmissão para humanos e na produtividade de animais domésticos.

Amostras

Bactérias
As amostras bacterianas a serem testadas são as presentes na nossa bacterioteca e as que serão isoladas e identificadas a partir de amostras de leite, sangue, secreções, abortos e restos placentários de animais de municípios localizados na região sul do Estado do Rio Grande do Sul.

Plantas
Serão testadas seis plantas medicinais presentes na região sul do estado do Rio Grande do Sul com indicação de uso em processos infecciosos e inflamatórios. As amostras de plantas serão obtidas na região para identificação botânica e para produção dos extratos.


Preparo dos extratos de plantas

As plantas serão colhidas e secas em lugar arejado e ao abrigo do sol. As partes da planta já secas serão moídas e colocadas em uma solução de álcool de cereais (70%) para extração alcoólica na proporção de 1 parte de planta para 5 partes de álcool e mantidas sob temperatura de 37ºC por uma semana. Após a amostra será rotaevaporada para a retirada do álcool. O concentrado obtido será armazenado em frasco âmbar e mantido sob refrigeração.
Serão utilizadas quatro soluções dos extratos em diferentes concentrações (10%, 5%, 2,5% e 1,25%). Para isso, amostra inicial será diluída em solução salina estéril à 0,85% até atingir as concentrações desejadas.

Preparo das suspensões bacterianas

As cepas a serem testadas, armazenadas sob temperatura inferior a -10ºC serão semeadas em meio de cultura Agar Brucella e incubadas em estufa bacteriológica a 37ºC em condições de aerobiose.
Colônias bacterianas características serão suspensas em tubos de ensaio e guardadas em geladeira para posterior utilização.

Testes da CIM dos extratos sobre cepas de bactérias do gênero Brucella spp

Para a determinação do efeito antimicrobiano dos extratos de plantas, será adotada a metodologia de diluição em caldo (Murray et al., 1999). Os extratos serão diluídos sucessivas vezes em microplacas de poliestireno, com caldo Müller Hinton duplo. Culturas puras de bactérias, cultivadas em Agar brucela serão diluídas em salina estéril na turbidez 0,5 da escala de MacFarland e acrescentadas a cada diluição do extrato, para uma concentração final de 5x105 UFC/mL. Todas as cepas bacterianas serão testadas em duplicata. Para a determinação da concentração inibitória mínima (CIM) será considerada a maior diluição em que não ocorrer turbidez do meio após 24-48h de incubação à temperatura de 37°C.

Testes da CBM dos extratos sobre cepas de bactérias do gênero Brucella spp

Serão semeados, por espalhamento com alça de Drigalski 10µL da suspensão bacteriana em placas contendo Agar Brucella os cultivos que não apresentaram crescimento aparente no teste da CIM.
Após incubação em estufa bacteriológica, serão consideradas eficazes as concentrações dos extratos onde não houve crescimento bacteriano. As análises serão realizadas em duplicata.

Identificar ao menos 6 plantas com indicação de uso em processos infecciosos e inflamatórios
Determinar a CIM e CBM dos extratos das plantas frente a cepas de brucella spp isoladas