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Dentre as principais justificativas para o desenvolvimento da presente pesquisa citamos: A
importância científica de se conhecer melhor os eventos moleculares que conduzem o
processo de invasão neoplásica, com ênfase nas alterações estromais que influenciam as
células epiteliais a promover a invasão da lâmina própria durante o processo de carcinogênese
bucal; A identificação de fibroblastos senescentes, reprogramados metabolicamente e
associados ao câncer, e/ou as proteínas secretadas por essas células, podem auxiliar na
previsão da progressão de displasias epiteliais bucais para carcinoma de boca, auxiliando,
dessa forma no diagnóstico e na determinação da conduta clinica frente a essas lesões; Espera-
se ainda contribuir com o conhecimento sobre as interações entre parênquima e estroma, por
meio de estudo in vitro, onde será avaliado se o meio condicionado proveniente de
fibroblastos orais senescentes pode resultar em um aumento nas taxas de proliferação e
migração celular nas células de CEB, com favorecimento da transição epitélio mesênquima,
assim como se o meio condicionado proveniente de células de CEB pode resultar na expressão
de um fenótipo senescente nos fibroblastos orais; No que tange aos efeitos dos fármacos
experimentais Navitoclax® e Venetoclax®, é esperado que esses agentes inibam o crescimento
e progressão das células de CEB através da redução da viabilidade, proliferação e migração
celular, com efeito similar ou reduzido na presença de meio condicionado oriundo de
fibroblastos orais senescentes. Ademais, é esperado que esses fármacos possam induzir a
apoptose seletiva de fibroblastos orais senescentes; O projeto também irá contribuir para o
avanço do conhecimento científico na área da odontologia e oncologia, por meio da
publicação dos resultados do estudo em revistas científicas de alto fator de impacto, assim
como possibilitar a formação de recursos humanos, por meio da orientação de alunos de pós-
graduação (mestrado e doutorado) e graduação (PIBIC).

1. ESTUDO RETROSPECTIVO
1.1- Seleção da amostra – 1° período – 5 meses
1.2. Padronização dos marcadores imunoistoquímicos –2° período – 6 meses
1.3. Reações imunoistoquímicas na amostra em estudo – 3° período – 8 meses
1.4. Análise dos resultados – 4° período – 4 meses
2. ESTUDO IN VITRO
2.1. Avalição da influência do meio condicionado de fibroblastos senescentes sobre as células
de carcinoma - 1° período – 10 meses
2.1.1. Indução da senescência na linhagem primária de fibroblastos orais
2.1.2. Cultivo dos fibroblastos senescentes e coleta dos meios condicionados
2.1.3. Avaliação do efeito do secretoma senescente dos fibroblastos sobre a viabilidade,
proliferação e migração, as células epiteliais das linhagens CAL27 e SCC9
2.1.4. A viabilidade celular: ensaio colorimétrico com Sulforrodamina B.
2.1.5. Avaliação da proliferação celular: método de quantificação baseado em corante
fluorescente (CyQUANT®, Thermo Fischer Scientific).
2.1.6. Avaliação da migração celular: método "Scratch"
2.2. Avaliação do secretoma de células do carcinoma sobre a indução de senescência em
fibroblastos orais - 2° período – 4 meses
2.2.1. Cultivo das linhagens de CEB (CAL27 e SCC9) e coleta dos meios condicionados
2.2.2. Exposição dos fibroblastos jovens ao meio condicionado de CEB.
2.2.3. Verificação da indução do perfil de senescência celular por meio da expressão de β-Gal.
2.2.4. Verificação da indução do perfil de senescência celular por ensaio de imunofluorescência
indireta para os marcadores p16INK4a e caveolina.
2.3. Avaliação do o efeito dos fármacos experimentais, Navitoclax® e Venetoclax® sobre as
células de CEB (CAL27 e SCC9) – 3° período – 9 meses
2.3.1. Curva dose resposta dos fármacos.
2.3.2. Avalição da viabilidade celular: ensaio colorimétrico com Sulforrodamina B
2.3.3. Avaliação da proliferação celular: método de quantificação baseado em corante
fluorescente (CyQUANT®, Thermo Fischer Scientific).
2.3.4. Avaliação da migração celular: método "Scratch".
2.3.5. Avaliação da transição epitélio-mesênquima nos tempos de 24, 48 e 72h.
2.3.6. Avalição da apoptose: kit de detecção de apoptose contendo Anexina V.
2.4. Análise dos Resultados - 4° período – 2 meses

• O aprimoramento do conhecimento científico em relação influência da senescência celular e
o papel do estroma tumoral na progressão e desenvolvimento do CEB, poderão abrir novos
horizontes em relação aos mecanismos envolvidos no processo de carcinogênese oral. Além
disso, os resultados relativos aos efeitos dos fármacos experimentais investigados poderão
estimular o desenvolvimento de outras pesquisas em modelos animais e em humanos,
contribuindo para que alternativas terapêuticas para o manejo do câncer de boca possam se
tornar disponíveis para a população;
• Divulgação dos resultados em congressos científicos, nacionais e internacionais, da área da
saúde, com resumo publicado nos anais do evento e publicação de artigos científicos em
revistas indexadas;
• Contribuir na formação de recursos humanos, por meio do envolvimento de acadêmicos de
graduação e de pós-graduação em odontologia, no campo da investigação científica;
• Contribuir para o fortalecimento da linha de pesquisa "Estudos dos eventos celulares e
moleculares envolvidos nos processos fisiológicos e patológicos de interesse para a
odontologia” do Programa de Pós-graduação em Odontologia da UFSC e UFPEL;
• Fortalecimento do grupo de Pesquisa em Diagnóstico Bucal da UFSC e UFPEL.