Nome do Projeto
Exposição ao Sevoflurano e sua influência em parâmetros reprodutivos em camundongos machos
Ênfase
Pesquisa
Data inicial - Data final
04/04/2024 - 04/04/2028
Unidade de Origem
Coordenador Atual
Área CNPq
Ciências Agrárias
Resumo
O sevoflurano é um anestésico inalatório mais utilizado em humanos (CESAROVIC et al. 2010) que
vem sendo usado a mais de vinte anos. Sua segurança e eficácia são bem estabelecidas e continuam
sendo estudadas mais precisamente para definir seus efeitos em diferentes populações, pacientes e
organismos (BRIONI et al. 2017). Diversos estudos veem mostrando que anestésicos inalatórios
podem causar danos ao sistema reprodutor masculino, e a toxicidade reprodutiva e danos na
espermatogênese possivelmente causados pelo sevoflurano podem estar relacionados à exposição
precoce (BADEN et al., 1979; CEYHAN et al., 2005; COATE et al., 1979). A possibilidade de que
a exposição crônica a baixos níveis de agentes anestésicos constitua um perigo para o profissional
da área da saúde, despertou e manteve o interesse mundial desde o início da década de 70.
Dependendo do momento da vida em que ocorre à exposição, existe a preocupação de que esses
mecanismos subjacentes possam resultar, por sua vez, em uma incidência aumentada de morte fetal,
aborto espontâneo, defeitos no nascimento (COHEN et al., 1971; COHEN et al., 1975).
Neste processo, através de lapatoromia, cauda do epidídimo e parte do ducto
deferente são removidos e colocados em placa de petri (35 mm), contendo 500 μl de Dulbeco’s
phosphate buffered saline (DPBS), previamente aquecido e mantido a 37ºC. A coleta do sêmen é
feita a partir do rompimento das estruturas anatômicas, a partir de 5 a 7 cortes, com auxílio de
agulha hipodérmica (30 G) e pinça, para obtenção de uma suspensão de espermatozóides. Esse
material é mantido na placa aquecida até que sejam realizadas as avaliações de cinética espermática
no sistema computadorizado CASA (motilidade total, progressiva, parâmetros de velocidade) e na
citometria de fluxo serão avaliada a integridade de membrana plasmática do espermatozoide,
funcionalidade mitocondrial, integridade de DNA espermática e produção de espécies reativas de
oxigênio. Experimento 2: Para esse experimento será utilizado acasalamento poligâmico 1 macho
para duas fêmeas conforme o CONCEA/2023. Serão utilizados 5 animais dos tratamentos de
exposição controle, aguda e crônica, para 10 fêmeas cada. Desta forma será no final a amostragem
de 188 filhotes. Os machos serão expostos aos tratamentos e depois acasalados com fêmeas que não
tiveram nenhum contato com o sevoflurano. Os filhotes serão avaliados a distância urogenital ao
nascimento, relação de machos e fêmeas, com 23 dias será avaliado a interação social e outras
avaliações comportamentais, após 33 dias será realizada a eutanásia dos animais para coleta de
córtex cerebral, hipocampos, cerebelo, análise estresse oxidativo e superoxido dismutase. Faz-se
necessário investigar sobre a importância, atuação e mecanismos de ação dos anestésicos inalatórios,
em especial o sevoflurano, no eixo hormonal, e na produção e desenvolvimento de espermatozoides;
assim como, o risco de exposição dos pacientes e de trabalhadores da área da saúde. A exposição
aos machos e depois acasalar os mesmos, vem responder uma lacuna sobre os efeitos na progênie,
pois existem alguns trabalhos que relatam o efeito deste anestésico no aumento de crianças com
autismo.
Objetivo Geral
Avaliar os efeitos da exposição ao sevoflurano em células espermáticas e hormônios reprodutivos de
camundongos Swiss Albina, frente à exposição aguda e subexposição crônica, comparando efeitos
imediatos e tardios, que compreendam desde o acometimento de células espermáticas já existentes
nos momentos de exposição, quanto à espermatogênese subsequente.
camundongos Swiss Albina, frente à exposição aguda e subexposição crônica, comparando efeitos
imediatos e tardios, que compreendam desde o acometimento de células espermáticas já existentes
nos momentos de exposição, quanto à espermatogênese subsequente.
Justificativa
A busca por novos dados e resultados sobre a influência dos anestésicos inalatórios em parâmetros
reprodutivos nos machos veem sendo trabalhado por diversos pesquisadores nos últimos anos.
Ceyhan (2005) e colaboradores realizaram uma pesquisa onde se avaliou a qualidade e quantidade
espermática de coelhos expostos a concentrações baixas de sevoflurano, simulando uma inalação
crônica (1.2% Concentração alveolar mínima – CAM) por 4 horas durante 5 dias. Foi encontrada
uma diminuição progressiva tanto na motilidade quanto na quantidade espermática quando
comparada com o grupo controle que não foi exposto ao anestésico. Além disso foi relatado
anormalidades no formato e dimensão dos espermatozoides, sendo considerados imaturos.
Estudos realizados com animais de laboratório têm demonstrado diversos resultados semelhantes na
avaliação do sevoflurano e seu impacto na reprodução. Yanhong et al. (2019), avaliou os efeitos da
exposição crônica em camundongos machos em três concentrações diferentes, sendo baixa (50ppm),
média (300ppm) e alta (1800ppm). Observou-se uma diminuição significante, dose dependente, da
quantidade de sêmen desses animais e identificado áreas de apoptose celular no tecido testicular e
túbulos seminíferos, onde nos grupos com maiores concentrações do anestésico resultou em maior
destruição celular e tecidual.
Este autor também avaliou os efeitos sobre a função hormonal dos animais, os níveis séricos de FSH
e LH apresentaram um aumento crescente conforme o grau de exposição ao sevoflurano, enquanto
os níveis de testosterona se mostraram baixos nos grupos com concentrações de 50 ppm, 300ppm e
1800ppm quando comparados com o controle. Os resultados demonstraram que o sevoflurano pode
afetar a secreção de hormônios sexuais de forma dose dependente. Os níveis de GnRH encontraramse alterados para menos, tanto no hipotálamo quanto na glândula pituitária
reprodutivos nos machos veem sendo trabalhado por diversos pesquisadores nos últimos anos.
Ceyhan (2005) e colaboradores realizaram uma pesquisa onde se avaliou a qualidade e quantidade
espermática de coelhos expostos a concentrações baixas de sevoflurano, simulando uma inalação
crônica (1.2% Concentração alveolar mínima – CAM) por 4 horas durante 5 dias. Foi encontrada
uma diminuição progressiva tanto na motilidade quanto na quantidade espermática quando
comparada com o grupo controle que não foi exposto ao anestésico. Além disso foi relatado
anormalidades no formato e dimensão dos espermatozoides, sendo considerados imaturos.
Estudos realizados com animais de laboratório têm demonstrado diversos resultados semelhantes na
avaliação do sevoflurano e seu impacto na reprodução. Yanhong et al. (2019), avaliou os efeitos da
exposição crônica em camundongos machos em três concentrações diferentes, sendo baixa (50ppm),
média (300ppm) e alta (1800ppm). Observou-se uma diminuição significante, dose dependente, da
quantidade de sêmen desses animais e identificado áreas de apoptose celular no tecido testicular e
túbulos seminíferos, onde nos grupos com maiores concentrações do anestésico resultou em maior
destruição celular e tecidual.
Este autor também avaliou os efeitos sobre a função hormonal dos animais, os níveis séricos de FSH
e LH apresentaram um aumento crescente conforme o grau de exposição ao sevoflurano, enquanto
os níveis de testosterona se mostraram baixos nos grupos com concentrações de 50 ppm, 300ppm e
1800ppm quando comparados com o controle. Os resultados demonstraram que o sevoflurano pode
afetar a secreção de hormônios sexuais de forma dose dependente. Os níveis de GnRH encontraramse alterados para menos, tanto no hipotálamo quanto na glândula pituitária
Metodologia
Os animais serão divididos em 3 grupos: O grupo controle (G0) não terá exposição ao sevoflurano
sendo eutanasiado através de deslocamento cervical ao final do experimento; o grupo 1 (G1) será
anestesiado de forma usual através de um vaporizador calibrado durante 60 minutos, com valores de
Concentração Alveolar Mínima de 4% para indução e manutenção em torno de 2%, e seus
parâmetros fisiológicos serão avaliados e monitorados constantemente, após 20 dias será eutanasiado
por deslocamento cervical (ZANIN, et al., 2023); o grupo2 (G2) será exposto ao anestésico de forma
crônica por seis horas em uma concentração média de 50ppm de sevoflurano (XU, et al., 2012) por
20 dias e posteriormente eutanasiado também por deslocamento cervical.
sendo eutanasiado através de deslocamento cervical ao final do experimento; o grupo 1 (G1) será
anestesiado de forma usual através de um vaporizador calibrado durante 60 minutos, com valores de
Concentração Alveolar Mínima de 4% para indução e manutenção em torno de 2%, e seus
parâmetros fisiológicos serão avaliados e monitorados constantemente, após 20 dias será eutanasiado
por deslocamento cervical (ZANIN, et al., 2023); o grupo2 (G2) será exposto ao anestésico de forma
crônica por seis horas em uma concentração média de 50ppm de sevoflurano (XU, et al., 2012) por
20 dias e posteriormente eutanasiado também por deslocamento cervical.
Indicadores, Metas e Resultados
- DETERMINAR O MOMENTO DA TOXICIDADE
- SE O EFEITO É CONTÍNUO AS PRÓXIMAS GERAÇÕES
- SE O EFEITO É CONTÍNUO AS PRÓXIMAS GERAÇÕES
Equipe do Projeto
Nome | CH Semanal | Data inicial | Data final |
---|---|---|---|
CARINE DAHL CORCINI | 2 | ||
CATIANE PRESTES DOS SANTOS | |||
GUSTAVO DESIRÉ ANTUNES GASTAL | |||
SABRINA KOHLS DE ARAUJO |