Nome do Projeto
Avaliação do efeito do tipo antidepressivo de 1-(2-(4-(4-etilfenil)-1H-1,2,3- triazoil)fenil)etan-1-ona em modelos pré-clínico de indução de depressão por estresse agudo e crônico em camundongos
Ênfase
Pesquisa
Data inicial - Data final
15/05/2024 - 15/12/2027
Unidade de Origem
Coordenador Atual
Área CNPq
Ciências Biológicas
Resumo
A depressão é um transtorno psiquiátrico grave, comum e de natureza recorrente, estando amplamente distribuído pela população mundial. Este transtorno é caracterizado por sentimentos persistentes de tristeza, desregulação dos níveis considerados normais de interesse em atividades prazerosas, alteração de apetite, sono, baixa autoestima e, em casos graves, ideação suicida. Também são observadas alterações físicas e cognitivas, prejudicando comportamento social e realização de atividades
cotidianas simples. Por se tratar de um distúrbio encontrado em grande parte da população
mundial, é de grande importância para a saúde pública em termos de prevalência, sofrimento,
morbidade e sobrecarga econômica, sendo classificada como uma das doenças mais onerosas da
sociedade. Diversas são as teorias existentes para explicar
a patogênese da depressão, como a teoria monoaminérgica, desregulação do eixo hipotálamopituitária-adrenal (HPA), neurogênese falha, neuroinflamação, anormalidade nos sistemas de segundos mensageiros, níveis elevados de fator de liberação de corticotrofina, dentre outros envolvimentos encontrados na literatura.
A depressão é um transtorno multifatorial, ou seja, resultante de múltiplos fatores como variáveis
biológicas, sociais, ambientais ou psicológicas. Dentre os fatores responsáveis por desencadear
sintomas depressivos, o estresse tem sido bastante estudado uma vez que a exposição a fatores
estressantes está ligada ao desenvolvimento de transtornos psiquiátricos. A depressão desencadeada por estresse resulta em alterações de diferentes regiões do cérebro, como hipocampo, córtex pré-frontal e amigdala. Essas regiões cerebrais são responsáveis por controlar comportamentos comumente ligados a depressão, como humor, medo, cognição e ansiedade. O mecanismo exato pelo qual o estresse induz a depressão ainda não é conhecido, mas sabe-se que diversas alterações são observadas e correlacionadas ao desenvolvimento de um quadro depressivo. O cortisol e a corticosterona (principais glicocorticoides em humanos e roedores,respectivamente) são hormônios esteroides produzidos e liberados mediante estresse, responsáveis por preparar o organismo para situações desafiadoras. O eixo HPA é o eixo
neuroendócrino responsável pelo controle da secreção de glicocorticoides, bem como pela inibição
destes. Um mal funcionamento do HPA ou uma exposição persistente a estressores pode resultar
em um aumento dos níveis basais destes hormônios, resultando em consequências danosas ao
Sistema Nervoso Central (SNC), como prejuízos na neuroplasticidade e morte celular.
Atualmente, diversos modelos pré-clínicos com exposição direta à diferentes estressores são
utilizados como ferramenta para a melhor compreensão da neurobiologia das doenças psiquiátricas.
Como exemplo de modelo pré-clínico estressor pode-se citar o modelo de estresse agudo por
contenção, onde o animal é contido, imóvel, por um período suficiente para que esse estresse gere
um fenótipo semelhante aos observados no TDM. Ainda quanto a modelos pré-clínicos via estresse,
há o modelo de Estresse Moderado Crônico e Imprevisível (EMCI), que visa expor os animais a
diferentes estressores por um período longo para, assim como no modelo citado anteriormente,
gerar fenótipo depressivo.
Para este projeto, foi selecionada uma molécula inédita da classe das 1,2,3-triazol-acetofenonas, a
qual já foi testada para efeitos do tipo antidepressivo e envolvimento com os sistemas de
monoaminas biológicas em estudos anteriores realizados pelo grupo de pesquisa. Com este projeto
pretende-se ampliar o conhecimento do mecanismo de ação da molécula 1-(2-(4-(4-ethylphenyl)-
1H-1,2,3-triazoyl)phenyl)ethan-1-one (ETAP) e avaliar seu efeito frente a diferentes estressores
mediante uso dos modelos pré-clínicos de estresse agudo por contenção e EMCI dois modelos
validados e comumente utilizados para esta avaliação.
Objetivo Geral
O objetivo geral deste projeto é avaliar o efeito da molécula 1-(2-(4-(4-ethylphenyl)-1H-1,2,3-
triazoyl)phenyl)ethan-1-one mediante diferentes estressores em camundongos.
triazoyl)phenyl)ethan-1-one mediante diferentes estressores em camundongos.
Justificativa
A depressão é uma doença mental crônica e recorrente encontrada em todos os lugares do mundo.
Boa parte da população apresenta ou já apresentou sintomas depressivos. Segundo dados da
Organização Pan-Americana da Saúde (OPAS)/ Organização Mundial da Saúde (OMS) (2020), cerca
de 280 milhões de pessoas sofrem de depressão. Dados atuais publicados pela OMS (2022) mostram
que com o período pandêmico vivido desde o início do ano de 2020 houve um aumento de 25% nos
casos de depressão e ansiedade. Por se tratar de um distúrbio multifatorial, as condições de vida e
exigências dos protocolos de segurança para COVID-19, como isolamento social, medo de infecção,
morte de entes queridos, dentre outros fatores como desemprego e problemas financeiros foram
fatores estressores e suficientes para desencadear este aumento dos casos de depressão. O Brasil
ocupa o segundo lugar no ranking de países com maior índice de depressão nas Américas, com 5,8%
de sua população sofrendo com esta patologia. As mulheres apresentam um risco maior de
surgimento de depressão, com variação de 10-25%, enquanto os homens apresentam um intervalo
menor, de 5-12% (APA, 1994). Outro fator contribuinte para o aumento no número de casos de
depressão é a falta de conscientização e busca por tratamento adequado. O preconceito e falta de
conhecimento em assuntos referentes a patologias neurais ainda é de grande contribuição para o
aumento deste problema social.
Os principais sintomas descritos pelo Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorder, quarta
edição (DSM-IV) para um quadro depressivo são alterações de apetite, sono, libido e demais
atividades que outrora trariam prazer, sentimento de culpa e até mesmo pensamentos suicidas. A
depressão é um transtorno incapacitante e, segundo dados da OMS, a segunda patologia que mais
causa morte no mundo.
Eventos estressores que ocorrem ao longo da vida podem se tornar um fator ambiental capaz de
gerar um quadro depressivo. Esta afirmação tem como base o levantamento realizado por Post
(1992) que verificou que aproximadamente 60% dos casos de depressão descritos são de
procedência de fatores estressantes, principalmente psicossociais. A exposição persistente a
estressores resulta numa ativação excessiva do eixo HPA com consequente liberação aumentada de
glicocorticoides, hormônios relacionados à resposta ao estresse, mas que, em quantidades
alteradas, se relacionam à fenótipos depressivos. (COLEMAN, 2006).
A fisiopatologia da depressão é complexa e ainda não é totalmente compreendida. Uma das teorias
existentes para a explicação da depressão é a teoria monoaminérgica. Esta teoria postula que o
distúrbio depressivo é causado por uma diminuição da função das monoaminas biológicas no
cérebro. Apesar do avanço da compreensão da patogênese da depressão, grande parte dos
fármacos ainda atuam na regulação do sistema de monoaminas. Entretanto, os antidepressivos
disponíveis têm mostrado uma taxa moderada de resposta, com aproximadamente 30% a 40% dos
pacientes não respondendo ao tratamento, além da longa latência para o início do efeito clínico
(HOLTZHEIMER; MAYBERG, 2011).
Para a diminuição ou resolução deste problema, se faz necessário o estudo de novos fármacos que
possam ser utilizados como novas opções no tratamento da depressão. Recentemente foi
sintetizado uma nova classe de compostos 1,2,3-triazoil-acetofenonas, com a finalidade de testá-las
pré-clinicamente em modelos de depressão em roedores. Um teste de docagem molecular foi
realizado para selecionar as 3 moléculas com maior probabilidade de inibição da enzima MAO e a
ETAP demonstrou inibir a MAO-A com boa eficácia. Após uma série de análises in vivo, foi
constatado um efeito do tipo antidepressivo na dose de 1 mg/kg e avaliado o efeito nos sistemas
serotoninérgico, noradrenérgico e dopaminérgico identificando uma provável ação pelos receptores serotoninérgicos 5-HT2A/2C e 5-HT4; receptores noradrenérgico α1, α2 e β; receptores
dopaminérgicos D1 e D2, pela redução do efeito do tipo antidepressivo apresentada anteriormente
quando utilizados antagonistas específicos destes receptores. Para uma melhor compreensão do
mecanismo de ação desta molécula, testes devem ser realizados para avaliar o efeito da ETAP com
indução de fenótipo depressivo via estresse. Para seguir o modelo testado para os sistemas
monoaminérgicos, serão utilizados camundongos machos para a avaliação do efeito da ETAP com o
estresse uma vez que o estudo com machos se mostrou eficaz para a avaliação do envolvimento da
ETAP com os diferentes sistemas. A escolha dos animais machos foi feita para evitar toda e qualquer
interferência dos ciclos hormonais observados nas fêmeas com os resultados obtidos. Desta forma,
a proposta deste projeto justifica-se pela necessidade de desenvolver novas ferramentas
farmacológicas com potencial terapêutico para a depressão.
Boa parte da população apresenta ou já apresentou sintomas depressivos. Segundo dados da
Organização Pan-Americana da Saúde (OPAS)/ Organização Mundial da Saúde (OMS) (2020), cerca
de 280 milhões de pessoas sofrem de depressão. Dados atuais publicados pela OMS (2022) mostram
que com o período pandêmico vivido desde o início do ano de 2020 houve um aumento de 25% nos
casos de depressão e ansiedade. Por se tratar de um distúrbio multifatorial, as condições de vida e
exigências dos protocolos de segurança para COVID-19, como isolamento social, medo de infecção,
morte de entes queridos, dentre outros fatores como desemprego e problemas financeiros foram
fatores estressores e suficientes para desencadear este aumento dos casos de depressão. O Brasil
ocupa o segundo lugar no ranking de países com maior índice de depressão nas Américas, com 5,8%
de sua população sofrendo com esta patologia. As mulheres apresentam um risco maior de
surgimento de depressão, com variação de 10-25%, enquanto os homens apresentam um intervalo
menor, de 5-12% (APA, 1994). Outro fator contribuinte para o aumento no número de casos de
depressão é a falta de conscientização e busca por tratamento adequado. O preconceito e falta de
conhecimento em assuntos referentes a patologias neurais ainda é de grande contribuição para o
aumento deste problema social.
Os principais sintomas descritos pelo Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorder, quarta
edição (DSM-IV) para um quadro depressivo são alterações de apetite, sono, libido e demais
atividades que outrora trariam prazer, sentimento de culpa e até mesmo pensamentos suicidas. A
depressão é um transtorno incapacitante e, segundo dados da OMS, a segunda patologia que mais
causa morte no mundo.
Eventos estressores que ocorrem ao longo da vida podem se tornar um fator ambiental capaz de
gerar um quadro depressivo. Esta afirmação tem como base o levantamento realizado por Post
(1992) que verificou que aproximadamente 60% dos casos de depressão descritos são de
procedência de fatores estressantes, principalmente psicossociais. A exposição persistente a
estressores resulta numa ativação excessiva do eixo HPA com consequente liberação aumentada de
glicocorticoides, hormônios relacionados à resposta ao estresse, mas que, em quantidades
alteradas, se relacionam à fenótipos depressivos. (COLEMAN, 2006).
A fisiopatologia da depressão é complexa e ainda não é totalmente compreendida. Uma das teorias
existentes para a explicação da depressão é a teoria monoaminérgica. Esta teoria postula que o
distúrbio depressivo é causado por uma diminuição da função das monoaminas biológicas no
cérebro. Apesar do avanço da compreensão da patogênese da depressão, grande parte dos
fármacos ainda atuam na regulação do sistema de monoaminas. Entretanto, os antidepressivos
disponíveis têm mostrado uma taxa moderada de resposta, com aproximadamente 30% a 40% dos
pacientes não respondendo ao tratamento, além da longa latência para o início do efeito clínico
(HOLTZHEIMER; MAYBERG, 2011).
Para a diminuição ou resolução deste problema, se faz necessário o estudo de novos fármacos que
possam ser utilizados como novas opções no tratamento da depressão. Recentemente foi
sintetizado uma nova classe de compostos 1,2,3-triazoil-acetofenonas, com a finalidade de testá-las
pré-clinicamente em modelos de depressão em roedores. Um teste de docagem molecular foi
realizado para selecionar as 3 moléculas com maior probabilidade de inibição da enzima MAO e a
ETAP demonstrou inibir a MAO-A com boa eficácia. Após uma série de análises in vivo, foi
constatado um efeito do tipo antidepressivo na dose de 1 mg/kg e avaliado o efeito nos sistemas
serotoninérgico, noradrenérgico e dopaminérgico identificando uma provável ação pelos receptores serotoninérgicos 5-HT2A/2C e 5-HT4; receptores noradrenérgico α1, α2 e β; receptores
dopaminérgicos D1 e D2, pela redução do efeito do tipo antidepressivo apresentada anteriormente
quando utilizados antagonistas específicos destes receptores. Para uma melhor compreensão do
mecanismo de ação desta molécula, testes devem ser realizados para avaliar o efeito da ETAP com
indução de fenótipo depressivo via estresse. Para seguir o modelo testado para os sistemas
monoaminérgicos, serão utilizados camundongos machos para a avaliação do efeito da ETAP com o
estresse uma vez que o estudo com machos se mostrou eficaz para a avaliação do envolvimento da
ETAP com os diferentes sistemas. A escolha dos animais machos foi feita para evitar toda e qualquer
interferência dos ciclos hormonais observados nas fêmeas com os resultados obtidos. Desta forma,
a proposta deste projeto justifica-se pela necessidade de desenvolver novas ferramentas
farmacológicas com potencial terapêutico para a depressão.
Metodologia
Testes Comportamentais
Serão realizados o teste do campo aberto (TCA), para a avaliação da atividade locomotora e
exploratória dos animais, os testes de preferência a sacarose (TPS), teste de borrifagem de solução
sacarose (TBS), teste do nado forçado (TNF) e teste de suspensão pela cauda (TSC), para avaliação
do comportamento do tipo depressivo dos animas.
Teste do campo aberto (TCA)
A fim de descartar qualquer efeito de um possível déficit locomotor causado pelos tratamentos nos
testes de comportamento depressivo, 4 minutos antes de cada TSC realizado os camundongos serão
avaliados no teste do campo aberto, conforme Walsh e Cummins, 1976. (os animais passarão pelo
TCA sempre anteriormente a testes comportamentais para depressão)
Teste de Preferência a Sacarose (TPS)
O TPS será utilizado para a avaliação do efeito do tipo antidepressivo da ETAP, via anedonia, frente
aos diferentes estressores utilizados nos modelos pré-clínicos. Os animais serão expostos aos
diferentes estressores descritos no item 9 e, posteriormente, tratados com ETAP (1 mg/kg, i.g.) a
fim de avaliar a interação da molécula com o estresse. O TNF será realizado seguindo a metodologia
descrita por Liu et al. (2018).
Testes Comportamentais
Serão realizados o teste do campo aberto (TCA), para a avaliação da atividade locomotora e
exploratória dos animais, os testes de preferência a sacarose (TPS), teste de borrifagem de solução
sacarose (TBS), teste do nado forçado (TNF) e teste de suspensão pela cauda (TSC), para avaliação
do comportamento do tipo depressivo dos animas.
Teste do campo aberto (TCA)
A fim de descartar qualquer efeito de um possível déficit locomotor causado pelos tratamentos nos
testes de comportamento depressivo, 4 minutos antes de cada TSC realizado os camundongos serão
avaliados no teste do campo aberto, conforme Walsh e Cummins, 1976. (os animais passarão pelo
TCA sempre anteriormente a testes comportamentais para depressão)
Teste de Preferência a Sacarose (TPS)
O TPS será utilizado para a avaliação do efeito do tipo antidepressivo da ETAP, via anedonia, frente
aos diferentes estressores utilizados nos modelos pré-clínicos. Os animais serão expostos aos
diferentes estressores descritos no item 9 e, posteriormente, tratados com ETAP (1 mg/kg, i.g.) a
fim de avaliar a interação da molécula com o estresse. O TNF será realizado seguindo a metodologia
descrita por Liu et al. (2018)
Teste de Borrifagem de Solução Sacarose (TBS)
O TBS será utilizado para a avaliação do efeito do tipo antidepressivo da ETAP, via apatia, frente aos
diferentes estressores utilizados nos modelos pré-clínicos. Os animais serão expostos aos diferentes
estressores descritos no item 9 e, posteriormente, tratados com ETAP (1 mg/kg, i.g.) a fim de avaliar
a interação da molécula com o estresse. O TNF será realizado seguindo a metodologia descrita por
Freitas et al. (2014).
Teste do nado forçado (TNF)
O TNF será utilizado para a avaliação do efeito do tipo antidepressivo da ETAP, via desespero, frente
aos diferentes estressores utilizados nos modelos pré-clínicos. Os animais serão expostos aos
diferentes estressores descritos no item 9.7 e, posteriormente, tratados com ETAP (1 mg/kg, i.g.) a
fim de avaliar a interação da molécula com o estresse. O TNF será realizado seguindo a metodologia
descrita por Porsolt et al. (1977).
Teste de suspensão da cauda (TSC)
O TSC será utilizado para a avaliação do efeito do tipo antidepressivo da ETAP, via desespero, frente
aos diferentes estressores utilizados nos modelos pré-clínicos. Os animais serão expostos aos
diferentes estressores descritos no item 9.7 e, posteriormente, tratados com ETAP (1 mg/kg, i.g.) a
fim de avaliar a interação da molécula com o estresse. O TSC será realizado seguindo a metodologia
descrita por Steru et al. (1985).
O papel estresse no efeito do tipo antidepressivo da ETAP
Para avaliar o efeito do estresse no efeito do tipo antidepressivo da ETAP, diferentes grupos de
animais serão expostos a diferentes estressores durante os protocolos descritos no item 9.7. Para o
modelo de estresse agudo por contenção, a ETAP na dose de 1mg/kg será administrada via i.g. 10
minutos após a finalização do processo de contenção. Para o primeiro grupo, 26 minutos após a
administração de ETAP será realizado o TCA e, após 30 minutos da administração de ETAP, será
realizado o TNF. Para o segundo grupo, 30 minutos após a administração de ETAP será realizado o
TSC e, após 36 minutos da administração da ETAP, será realizado o TBS. Para o modelo EMCI, a ETAP
na dose de 1 mg/kg será administrada via i.g. será administrada 30 minutos antes de cada estressor.
Os testes comportamentais serão realizados conforme desenho experimental descrito no item
9.7.2.
Testes Ex vivo
Análise dos níveis de corticosterona
Na análise ex vivo para a verificação do efeito da ETAP (1 mg/kg, i.g.) frente ao estresse, serão
quantificados os níveis de corticosterona no córtex pré-frontal e hipocampo dos animais tratados.
Os animais serão eutanasiados e terão os cérebros dissecados imediatamente após a finalização do último teste comportamental realizado. As amostras serão mantidas a -80ºC até realização das
análises.
Análise da peroxidação lipídica
Na análise ex vivo para a verificação do efeito da ETAP (1 mg/kg, i.g.) na peroxidação lipídica frente
aos estressores utilizados, será realizada a técnica TBARS no córtex pré-frontal e hipocampo dos
animais tratados. Os animais serão eutanasiados e terão os cérebros dissecados imediatamente
após a finalização do último teste comportamental realizado. As amostras serão mantidas a -80ºC
até realização das análises.
Análise da neuroinflamação
Na análise ex vivo para a verificação do efeito da ETAP (1 mg/kg, i.g.) na neuroinflamação frente aos
estressores utilizados, serão quantificados os níveis das citocinas pró-inflamatórias IL-6 e TNF-α no
córtex pré-frontal e hipocampo dos animais tratados. Os animais serão eutanasiados e terão os
cérebros dissecados imediatamente após a finalização do último teste comportamental realizado.
As amostras serão mantidas a -80ºC até realização das análises.
Análise da neuroplasticidade
Na análise ex vivo para a verificação do efeito da ETAP (1 mg/kgi.g.) na neuroplasticidade frente aos
estressores utilizados, será quantificado o nível de BDNF no córtex pré-frontal e hipocampo dos
animais tratados. Os animais serão eutanasiados e terão os cérebros dissecados imediatamente
após a finalização do último teste comportamental realizado. As amostras serão mantidas a -80ºC
até realização das análises.
Serão realizados o teste do campo aberto (TCA), para a avaliação da atividade locomotora e
exploratória dos animais, os testes de preferência a sacarose (TPS), teste de borrifagem de solução
sacarose (TBS), teste do nado forçado (TNF) e teste de suspensão pela cauda (TSC), para avaliação
do comportamento do tipo depressivo dos animas.
Teste do campo aberto (TCA)
A fim de descartar qualquer efeito de um possível déficit locomotor causado pelos tratamentos nos
testes de comportamento depressivo, 4 minutos antes de cada TSC realizado os camundongos serão
avaliados no teste do campo aberto, conforme Walsh e Cummins, 1976. (os animais passarão pelo
TCA sempre anteriormente a testes comportamentais para depressão)
Teste de Preferência a Sacarose (TPS)
O TPS será utilizado para a avaliação do efeito do tipo antidepressivo da ETAP, via anedonia, frente
aos diferentes estressores utilizados nos modelos pré-clínicos. Os animais serão expostos aos
diferentes estressores descritos no item 9 e, posteriormente, tratados com ETAP (1 mg/kg, i.g.) a
fim de avaliar a interação da molécula com o estresse. O TNF será realizado seguindo a metodologia
descrita por Liu et al. (2018).
Testes Comportamentais
Serão realizados o teste do campo aberto (TCA), para a avaliação da atividade locomotora e
exploratória dos animais, os testes de preferência a sacarose (TPS), teste de borrifagem de solução
sacarose (TBS), teste do nado forçado (TNF) e teste de suspensão pela cauda (TSC), para avaliação
do comportamento do tipo depressivo dos animas.
Teste do campo aberto (TCA)
A fim de descartar qualquer efeito de um possível déficit locomotor causado pelos tratamentos nos
testes de comportamento depressivo, 4 minutos antes de cada TSC realizado os camundongos serão
avaliados no teste do campo aberto, conforme Walsh e Cummins, 1976. (os animais passarão pelo
TCA sempre anteriormente a testes comportamentais para depressão)
Teste de Preferência a Sacarose (TPS)
O TPS será utilizado para a avaliação do efeito do tipo antidepressivo da ETAP, via anedonia, frente
aos diferentes estressores utilizados nos modelos pré-clínicos. Os animais serão expostos aos
diferentes estressores descritos no item 9 e, posteriormente, tratados com ETAP (1 mg/kg, i.g.) a
fim de avaliar a interação da molécula com o estresse. O TNF será realizado seguindo a metodologia
descrita por Liu et al. (2018)
Teste de Borrifagem de Solução Sacarose (TBS)
O TBS será utilizado para a avaliação do efeito do tipo antidepressivo da ETAP, via apatia, frente aos
diferentes estressores utilizados nos modelos pré-clínicos. Os animais serão expostos aos diferentes
estressores descritos no item 9 e, posteriormente, tratados com ETAP (1 mg/kg, i.g.) a fim de avaliar
a interação da molécula com o estresse. O TNF será realizado seguindo a metodologia descrita por
Freitas et al. (2014).
Teste do nado forçado (TNF)
O TNF será utilizado para a avaliação do efeito do tipo antidepressivo da ETAP, via desespero, frente
aos diferentes estressores utilizados nos modelos pré-clínicos. Os animais serão expostos aos
diferentes estressores descritos no item 9.7 e, posteriormente, tratados com ETAP (1 mg/kg, i.g.) a
fim de avaliar a interação da molécula com o estresse. O TNF será realizado seguindo a metodologia
descrita por Porsolt et al. (1977).
Teste de suspensão da cauda (TSC)
O TSC será utilizado para a avaliação do efeito do tipo antidepressivo da ETAP, via desespero, frente
aos diferentes estressores utilizados nos modelos pré-clínicos. Os animais serão expostos aos
diferentes estressores descritos no item 9.7 e, posteriormente, tratados com ETAP (1 mg/kg, i.g.) a
fim de avaliar a interação da molécula com o estresse. O TSC será realizado seguindo a metodologia
descrita por Steru et al. (1985).
O papel estresse no efeito do tipo antidepressivo da ETAP
Para avaliar o efeito do estresse no efeito do tipo antidepressivo da ETAP, diferentes grupos de
animais serão expostos a diferentes estressores durante os protocolos descritos no item 9.7. Para o
modelo de estresse agudo por contenção, a ETAP na dose de 1mg/kg será administrada via i.g. 10
minutos após a finalização do processo de contenção. Para o primeiro grupo, 26 minutos após a
administração de ETAP será realizado o TCA e, após 30 minutos da administração de ETAP, será
realizado o TNF. Para o segundo grupo, 30 minutos após a administração de ETAP será realizado o
TSC e, após 36 minutos da administração da ETAP, será realizado o TBS. Para o modelo EMCI, a ETAP
na dose de 1 mg/kg será administrada via i.g. será administrada 30 minutos antes de cada estressor.
Os testes comportamentais serão realizados conforme desenho experimental descrito no item
9.7.2.
Testes Ex vivo
Análise dos níveis de corticosterona
Na análise ex vivo para a verificação do efeito da ETAP (1 mg/kg, i.g.) frente ao estresse, serão
quantificados os níveis de corticosterona no córtex pré-frontal e hipocampo dos animais tratados.
Os animais serão eutanasiados e terão os cérebros dissecados imediatamente após a finalização do último teste comportamental realizado. As amostras serão mantidas a -80ºC até realização das
análises.
Análise da peroxidação lipídica
Na análise ex vivo para a verificação do efeito da ETAP (1 mg/kg, i.g.) na peroxidação lipídica frente
aos estressores utilizados, será realizada a técnica TBARS no córtex pré-frontal e hipocampo dos
animais tratados. Os animais serão eutanasiados e terão os cérebros dissecados imediatamente
após a finalização do último teste comportamental realizado. As amostras serão mantidas a -80ºC
até realização das análises.
Análise da neuroinflamação
Na análise ex vivo para a verificação do efeito da ETAP (1 mg/kg, i.g.) na neuroinflamação frente aos
estressores utilizados, serão quantificados os níveis das citocinas pró-inflamatórias IL-6 e TNF-α no
córtex pré-frontal e hipocampo dos animais tratados. Os animais serão eutanasiados e terão os
cérebros dissecados imediatamente após a finalização do último teste comportamental realizado.
As amostras serão mantidas a -80ºC até realização das análises.
Análise da neuroplasticidade
Na análise ex vivo para a verificação do efeito da ETAP (1 mg/kgi.g.) na neuroplasticidade frente aos
estressores utilizados, será quantificado o nível de BDNF no córtex pré-frontal e hipocampo dos
animais tratados. Os animais serão eutanasiados e terão os cérebros dissecados imediatamente
após a finalização do último teste comportamental realizado. As amostras serão mantidas a -80ºC
até realização das análises.
Indicadores, Metas e Resultados
Espera-se com este projeto melhorar o entendimento a cerca do efeito antidepressivo da ETAP, a fim de desenvolver novas alternativas terapêuticas para a depressão. Este projeto também contribuirá para formação de recursos humanos qualificados.
Equipe do Projeto
| Nome | CH Semanal | Data inicial | Data final |
|---|---|---|---|
| CESAR AUGUSTO BRUNING | 2 | ||
| CRISTIANI FOLHARINI BORTOLATTO | 2 | ||
| DIEGO DA SILVA ALVES | 1 | ||
| MARCELO HEINEMANN PRESA | |||
| MARCIA JUCIELE DA ROCHA |