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20/02/2025 - 20/07/2027

Ciências Biológicas

Embora a vacinação em larga escala continue sendo o método mais eficaz para prevenir perdas em animais de produção causadas por doenças infecciosas, muitas das vacinas disponíveis atualmente apresentam limitações quanto à eficácia e segurança. As vacinas veterinárias convencionais, especialmente aquelas que utilizam patógenos vivos atenuados ou inativados, podem estimular uma resposta imunológica menos robusta e oferecer menor proteção contra determinadas variantes. No caso das vacinas atenuadas, ainda existe o risco de reversão à forma virulenta, além da possibilidade de causar imunossupressão em animais vulneráveis. Dessa forma, as vacinas recombinantes emergem como uma solução promissora, proporcionando uma abordagem mais eficiente, prática e segura para a imunização animal. Sistemas de entrega na forma de adjuvantes, podem potencializar as respostas imunológicas provocadas pela administração de antígenos, seja protegendo o antígeno ou direcionando-o especificamente ao alvo desejado, assim intensificando a resposta imune gerada pelo antígeno recombinante. Uma estratégia para o direcionamento de antígenos envolve o uso de moléculas como as lectinas, que desempenham um papel crucial ao reconhecer glicanos presentes em receptores celulares. Essa interação contribui significativamente para o fortalecimento da resposta imunológica quando os antígenos são administrados. Além disso, as lectinas são essenciais na resposta imune inata de diversos animais, facilitando tanto a adesão quanto o reconhecimento de patógenos. Dada a capacidade das lectinas de potencializar a resposta imunológica, surge a possibilidade de utilizar sistemas de entrega de antígenos combinados com lectinas como adjuvantes. Vários microrganismos são empregados como hospedeiros para a apresentação de peptídeos ou proteínas recombinantes em suas superfícies celulares. A bactéria Gram-negativa Escherichia coli é o hospedeiro mais utilizado, principalmente devido à sua habilidade de produzir proteínas recombinantes em grandes quantidades e à sua facilidade de manipulação genética. Uma doença que pode se beneficiar dessa estratégia, e que será usada como modelo de estudo nos experimentos deste projeto, é a enterite necrótica (ENA). A ENA é uma doença infecciosa entérica de origem multifatorial, de grande relevância, cuja causa está associada à infecção pela bactéria Clostridium perfringens dos tipos A e G, ocorrendo em situações de desequilíbrio da microbiota intestinal e/ou comprometimento da imunidade do animal. Diante disso, este estudo tem como objetivo avaliar a utilização de uma quimera antigênica composta por domínios de três toxinas altamente imunogênicas de Clostridium perfringens, unidas por um linker rígido a duas lectinas, denominadas Lec1 e Lec2. Além disso, será analisada outra construção recombinante, na qual a lectina Lec1 foi incorporada à proteína de fusão Lpp-OmpA, um sistema de exibição de superfície bacteriana. O intuito é avaliar a capacidade dessa lectina de direcionar o antígeno ao seu local-alvo. Assim, busca-se desenvolver diferentes imunógenos vacinais para a profilaxia de diferentes doenças veterinárias, avaliando a proteção e as respostas imunológicas humoral e celular induzidas com o objetivo de criar uma vacina eficaz contra estas enfermidades. Para isso, as construções recombinantes serão expressas na cepa BL21 (DE3) STAR de E. coli e inativadas com formaldeído para a formulação da vacina não purificada. As proteínas purificadas serão obtidas por meio de cromatografia de afinidade ao níquel.