Nome do Projeto
PEPTÍDEOS ANTIMICROBIANOS DA MOSCA “SOLDADO NEGRO” nativos e recombinantes
Ênfase
Pesquisa
Data inicial - Data final
02/12/2025 - 02/12/2029
Unidade de Origem
Coordenador Atual
Área CNPq
Ciências Agrárias
Resumo
A saúde e bem-estar dos rebanhos de criação de frangos têm sido beneficiadas pelo uso de doses contínuas e sub-terapêuticas de antibióticos como promotores de crescimento (APC) a fim de prevenir doenças. Contudo, essa prática tem levado ao surgimento de microrganismos multidroga resistentes que ameaçam a saúde animal e humana devido à redução significativa da eficácia desses fármacos. Como consequência, órgãos reguladores têm limitado o uso de APC e, como consequência, doenças que antes eram controladas, como a Enterite Necrótica de Aves (ENA) causada por Clostridium perfringens, têm re-emergido e causado prejuízos significativos ao afetar a conversão alimentar e comprometer a produção e ganho financeiro do produtor. A ENA é uma das doenças mais importantes para a avicultura e a estimativa de prejuízo anual de US$6 bilhões, reforça a importância de inovações que substituam a ação dos APCs. Uma alternativa são os peptídeos com atividade antimicrobiana (PAM) derivados da mosca Hermetia illuscens (Black Soldier Fly - BSF) que possuem baixo risco de resistência e já demonstraram ação inibitória contra C. perfringens. Considerando a capacitação e experiência da equipe proponente na expressão de moléculas recombinantes, no desenvolvimento de fármacos e na produção de farinha de larvas BSF (FLBSF), um fenômeno mundial na alimentação animal pelo alto valor nutricional, propriedades antimicrobianas e produção sustentável através do princípio da economia circular, propomos a elaboração de dois protótipos inovadores e sustentáveis contendo PAMs de BSF: um suplemento de farinha integral de larvas da BSF contendo alto teor de PAM nativos (FLBSFplusPAM) e um aditivo composto por peptídeos recombinantes de amplo espectro desenvolvidos por biologia sintética (rPAMmix). Para obter a FLBSFplusPAM, larvas de BSF serão alimentadas com dietas probióticas (inovação incremental) e avaliadas quanto à expressão diferencial de PAMs nativos (RT-qPCR). As farinhas produzidas a partir das larvas suplementadas serão caracterizadas quanto ao perfil bromatológico, físico-químico e microbiológico. Para obter o rPAMmix, a seleção dos peptídeos com potencial de ação contra C. perfringens precederá as etapas de desenho, refinamento e otimização in silico das sequências sintéticas a fim de obter moléculas estáveis, solúveis e resistentes à proteólise. As sequências sintéticas obtidas serão clonadas (vetor pOC-Helper) e expressas em Escherichia coli (inovação disruptiva) para obtenção da bacterina recombinante (inovação incremental), uma tecnologia já validada para produção de antígenos vacinais. Os critérios para seleção dos PAMs que irão compor o rPAMmix serão baseados em solubilidade, estabilidade e ação antimicrobiana in vitro. Por fim, os bioinsumos serão encapsulados em sistema de entrega baseado em polímeros biodegradáveis que permite a liberação lenta e contínua dos insumos a fim de garantir sua proteção às enzimas digestivas até a entrega viável no intestino delgado (inovação incremental). O projeto, além de auxiliar na formação de recursos humanos, o caráter de ineditismo da inovação, sua independência de tecnologias importadas e o grande interesse da indústria do setor, contribuirá com a chegada do produto no mercado.
Objetivo Geral
Incrementar a produção de PAMs de BSF através do uso de probióticos na alimentação das larvas e produzir PAMs recombinantes em Escherichia coli.
Justificativa
Considerando a importância da avicultura de corte na economia brasileira e os prejuízos causados no setor pela maior ocorrência de doenças devido a limitação ao uso de promotores de crescimento à base de antibióticos, motivação dessa pesquisa, a principal hipótese investigada neste projeto é o uso dos peptídeos antimicrobianos de insetos como substituto sustentável aos promotores de crescimento convencionais na criação de aves. Atualmente, o setor agropecuário depende de tecnologias importadas e avançar na inovação tecnológica nacional pode impactar na geração de novos produtos nacionais.
Metodologia
Para estimular a produção de PAMs nativos, inovação que adiciona funcionalidades à farinha, as larvas de BSF serão alimentadas com dietas acrescidas de microrganismos probióticos e aquelas que possibilitarem desenvolvimento larval igual ou superior a dieta padrão, serão selecionadas para fabricação das farinhas integrais cujo perfil físico-químico e microbiológico também será determinado. A expressão diferencial dos PAMs nativos pelas larvas tratadas com probióticos será quantificada por RT-qPCR (Moretta et al., 2020) e o impacto da administração das dietas será avaliado com base nos parâmetros de tempo de desenvolvimento larval, massa fresca e seca das larvas e conversão alimentar. Os parâmetros de desenvolvimento biológico das larvas, caracterização bromatológica e produção de PAMs serão utilizados como critérios para determinar a melhor farinha integral.
Após uma ampla revisão bibliográfica e consultas às bases de dados disponíveis, ferramentas in silico serão empregadas no design, construção e refinamento das moléculas recombinantes a fim de obter peptídeos estáveis, solúveis e resistentes à degradação proteolítica. Os genes sintéticos serão clonados no vetor pOC-Helper, que permite a expressão simultânea de até três proteínas na mesma célula hospedeira, expressos em E. coli empregando a plataforma de bacterina recombinante (Moreira et al., 2022) e caracterizados de acordo com a solubilidade (Alves et al., 2022) e atividade antimicrobiana in vitro (Park et al., 2014). Os rPAMs com maior potencial de ação contra C. perfringens serão selecionados para compor o protótipo rPAMmix.
uma plataforma de encapsulamento em polímeros biodegradáveis será empregada a fim de garantir a entrega viável dos PAMs no intestino delgado da ave, local de ação do C. perfringens. Na prática, essa tecnologia permite a liberação lenta e contínua dos insumos, melhorando assim seu aproveitamento, e reduzindo os riscos de intoxicação. A inocuidade das formulações será determinada em camundongos (in vivo).
Após uma ampla revisão bibliográfica e consultas às bases de dados disponíveis, ferramentas in silico serão empregadas no design, construção e refinamento das moléculas recombinantes a fim de obter peptídeos estáveis, solúveis e resistentes à degradação proteolítica. Os genes sintéticos serão clonados no vetor pOC-Helper, que permite a expressão simultânea de até três proteínas na mesma célula hospedeira, expressos em E. coli empregando a plataforma de bacterina recombinante (Moreira et al., 2022) e caracterizados de acordo com a solubilidade (Alves et al., 2022) e atividade antimicrobiana in vitro (Park et al., 2014). Os rPAMs com maior potencial de ação contra C. perfringens serão selecionados para compor o protótipo rPAMmix.
uma plataforma de encapsulamento em polímeros biodegradáveis será empregada a fim de garantir a entrega viável dos PAMs no intestino delgado da ave, local de ação do C. perfringens. Na prática, essa tecnologia permite a liberação lenta e contínua dos insumos, melhorando assim seu aproveitamento, e reduzindo os riscos de intoxicação. A inocuidade das formulações será determinada em camundongos (in vivo).
Indicadores, Metas e Resultados
Farinha de BSF enriquecida naturalmente com PAMs; PAMs recombinantes de BSF produzidos em E. coli e avaliados contra microrganismos patogênicos.
Equipe do Projeto
| Nome | CH Semanal | Data inicial | Data final |
|---|---|---|---|
| ANGELA NUNES MOREIRA | 2 | ||
| FABRICIO ROCHEDO CONCEICAO | 2 | ||
| FLÁVIA ROCHA MEDEIROS | |||
| JOSIANE DE OLIVEIRA FEIJÓ | |||
| MARILIANA LUIZA FERREIRA ALVES | |||
| MÁRCOS ROBERTO ALVES FERREIRA | |||
| NATALIA KOMMLING VILELA | |||
| RAFAEL DA SILVA GONÇALVES | |||
| RAFAEL RODRIGUES RODRIGUES | |||
| SANDRO DANIEL NÖRNBERG | |||
| STEFANIE BRESSAN WALLER |
Fontes Financiadoras
| Sigla / Nome | Valor | Administrador |
|---|---|---|
| CNPq / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico | R$ 178.750,00 | Coordenador |
Plano de Aplicação de Despesas
| Descrição | Valor |
|---|---|
| 339030 - Material de Consumo | R$ 23.950,00 |
| 339020 - Auxílio Financeiro a Pesquisador | R$ 124.800,00 |
| 449052 - Equipamentos e Material Permanente | R$ 30.000,00 |