Nome do Projeto
Microbiota associada a dentes avulsionados
Ênfase
Pesquisa
Data inicial - Data final
30/06/2025 - 30/06/2026
Unidade de Origem
Coordenador Atual
Área CNPq
Ciências da Saúde
Resumo
Contexto: Existem poucos relatos sobre a microflora relacionada à avulsão dental na literatura. Objetivo: O objetivo deste projeto de pesquisa é isolar e identificar o perfil microbiano associado a casos de avulsão dental.Metodologia: Este será um estudo transversal, com pacientes selecionados de acordo com os seguintes critérios de inclusão: ter um dente avulsionado tratado com replantação imediata ou mediata, necessitar de tratamento endodôntico, não estar utilizando antibióticos e ter assinado o termo de consentimento. Espera-se que seis pacientes se enquadrem nos critérios de inclusão, totalizando até oito dentes avulsionados. Cada paciente será atendido uma vez para avaliação clínica e outra vez para coleta de amostras após o diagnóstico de necrose pulpar. As amostras microbiológicas serão coletadas do canal radicular, utilizando pontos de papel absorvente estéreis. As amostras serão cultivadas em diversos meios de cultura, incluindo Blood Agar (microorganismos totais), BHI Agar (bactérias microaerofílicas totais), Mitis Salivarius Agar (estreptococos), Mannitol Salt Agar (Staphylococcus aureus), MacConkey Agar (enterobactérias), Rogosa Agar (lactobacilos) e Sabouraud Dextrose Agar (leveduras). A amostragem do campo operatório descontaminado com um swab estéril servirá como controle negativo. Após a incubação, as unidades formadoras de colônias serão contadas e as colônias cultiváveis serão identificadas através de provas bioquímicas disponíveis em cartões de identificação ID-GPC do VITEK 2 SISTEM (bioMérieux). Também se pretende isolar bactérias microaerofílicas facultativas e enterobactérias. A pesquisa buscará evidenciar que uma infecção polimicrobiana desempenha um papel importante na infecção endodôntica de dentes avulsionados.
Objetivo Geral
Isolar e identificar o perfil microbiano associado a casos de avulsão dental
Justificativa
A infecção polimicrobiana em dentes avulsionados pode complicar o tratamento endodôntico. Compreender os microrganismos envolvidos permite uma abordagem mais eficaz para a prevenção e tratamento dessas infecções. A escassez de dados sobre a microflora relacionada à avulsão dental na literatura científica destaca a necessidade deste estudo. Os resultados poderão preencher uma lacuna importante, contribuindo para o conhecimento na área de odontologia.
Metodologia
Aspectos Éticos
A pesquisa será realizada com pacientes atendidos no projeto extracurricular do Centro de Estudo, Tratamento e Acompanhamento de Traumatismos Alveolares e Dentários da Faculdade de Odontologia de Pelotas (Brasil). Os pacientes serão informados sobre as características da pesquisa e concordarão em participar, assinando o Termo de Consentimento Livre e Esclarecido.
Seleção dos Pacientes
Os critérios de inclusão de pacientes serão: apresentar pelo menos um dente avulsionado, necessitar de tratamento endodôntico e não estar sob cobertura antibiótica no momento da abordagem endodôntica. Pacientes cujos dentes avulsionados apresentarem outro tipo de lesão dentária além da avulsão, ou cáries, ou restaurações serão excluídos, assim como pacientes com condições médicas ou em tratamento concomitante para distúrbios que afetem a cicatrização ou que possam suprimir o sistema imunológico.
Amostra
Serão incluídos seis pacientes no estudo durante o período de seis meses, em fluxo continuo.
Avaliação Clínica
Na primeira consulta, os pacientes serão submetidos à anamnese, e dados sociodemográficos, incluindo idade, sexo e histórico médico do paciente, serão coletados. A avaliação clínica também será conduzida na primeira consulta, coletando informações relacionadas ao trauma, como: local do trauma, dentes envolvidos, tempo extra-alveolar, meio de armazenamento do dente, período de acompanhamento, desenvolvimento radicular, antibioticoterapia e imunização antitetânica.
Coleta Microbiológica
Amostras para investigação microbiológica serão coletadas da câmara pulpar e dos terços cervical, médio e apical do canal radicular de dentes avulsionados reimplantados. Isso será realizado de acordo com o método descrito por Baumotte et al. (6). A antissepsia do campo será feita após anestesia local e aplicação de isolamento absoluto com dique de borracha (sempre que possível), utilizando digluconato de clorexidina a 2%. Nos casos em que a aplicação do dique de borracha for impraticável, o isolamento do campo será realizado com rolos de algodão estéril e gaze após a antissepsia com digluconato de clorexidina a 2%.
Uma amostra coletada do campo operatório após a antissepsia será utilizada como controle.
O acesso à câmara pulpar será realizado com brocas esféricas estéreis sob irrigação com soro fisiológico estéril, e a coleta será feita com cones de papel estéreis.
A primeira amostra será coletada durante a abordagem da câmara pulpar, e outras três amostras serão coletadas após a penetração desinfetante. Cada espécime será colocado em um tubo de vidro estéril de 5,0 ml contendo 2 ml de solução salina estéril e, em seguida, será imediatamente enviado ao laboratório de microbiologia oral no mesmo edifício.
O tempo de cada coleta não excederá quarenta e cinco minutos, e o tempo entre a coleta e a semeadura em meios de ágar seletivos não excederá quinze minutos.
Cada tubo contendo um cone de papel será colocado em um rotamixer por 30 segundos em capela de fluxo laminar para criar uma suspensão. Em seguida, as amostras serão diluídas 10 vezes em tubos eppendorf estéreis com soro fisiológico estéril, de concentrações de 10⁰ a 10⁻⁴. Após a diluição, cada grupo de concentrações será semeado em meios de ágar seletivos para Enterobactérias (Ágar MacConkey – BD Difco™, Franklin Lakes, NJ USA 07417), para leveduras (Ágar Sabouraud Dextrose - NEOGEN® Corporation, Lasher Place, MI USA 48912), para Estreptococos (Ágar Mitis Salivarius - NEOGEN® Corporation), para Staphylococcus aureus (Ágar Sal Manitol - NEOGEN® Corporation), para Lactobacillus (Ágar Rogosa - BD Difco™), para microrganismos totais (Ágar Sangue Brucella Sheep, suplementado com hemina 10mg.ml⁻¹ e menadiona 1mg.ml⁻¹ – BD Difco™) e para cultura microaerofílica (Ágar Brain-Heart Infusion - NEOGEN® Corporation).
Placas com Ágar MacConkey, Ágar Sabouraud Dextrose, Ágar Sal Manitol e Ágar Sangue Brucella serão incubadas em atmosfera aeróbica por 48 horas a 37ºC e examinadas diariamente. As placas com Ágar Mitis Salivarius, Ágar Rogosa e Ágar BHI serão incubadas por 72 horas a 37ºC em jarras microaerofílicas com geradores microaerofílicos comercialmente disponíveis (ANAEROBAC – Probac, São Paulo, SP, Brasil).
Após a incubação, as Unidades Formadoras de Colônias (UFC) serão contadas, e então a análise microscópica da morfologia e das reações de Gram para cada tipo de colônia diferente será conduzida. As cepas viáveis serão isoladas e cultivadas por 18 horas, sendo então submetidas à análise pelo sistema VITEK 2 (bioMérieux Brasil™ SA, RJ, Brasil).
Para identificação no sistema VITEK 2, as cepas isoladas serão previamente cultivadas em Ágar Trypticase Soy por 18 horas a 37ºC e condições aeróbicas. Após a incubação, um inóculo será preparado de acordo com o valor 0,5 da escala MacFarland, com o auxílio de um espectrofotômetro de bancada (bioMérieux Brasil™ SA). Em seguida, os tubos contendo o inóculo serão conectados ao cartão de identificação ID-GPC (bioMérieux Brasil™ SA), com provas bioquímicas para identificação de cocos aeróbicos Gram-positivos. Finalmente, a leitura do cartão ID-GPC será realizada no equipamento VITEK 2 (bioMérieux Brasil™ SA) por sensores ópticos.
Análise Estatística
Este será um estudo qualitativo-quantitativo, no qual será realizada alguma análise estatística com o SPSS Statistics versão 17.0 (SPSS Inc, Chicago, IL, EUA). Uma análise de variância (ANOVA on ranks) será utilizada para comparações entre grupos e indivíduos, e o teste não paramétrico complementar será o Kruskal-Wallis; algumas descrições baseadas nos casos adequados constituirão a análise qualitativa.
A pesquisa será realizada com pacientes atendidos no projeto extracurricular do Centro de Estudo, Tratamento e Acompanhamento de Traumatismos Alveolares e Dentários da Faculdade de Odontologia de Pelotas (Brasil). Os pacientes serão informados sobre as características da pesquisa e concordarão em participar, assinando o Termo de Consentimento Livre e Esclarecido.
Seleção dos Pacientes
Os critérios de inclusão de pacientes serão: apresentar pelo menos um dente avulsionado, necessitar de tratamento endodôntico e não estar sob cobertura antibiótica no momento da abordagem endodôntica. Pacientes cujos dentes avulsionados apresentarem outro tipo de lesão dentária além da avulsão, ou cáries, ou restaurações serão excluídos, assim como pacientes com condições médicas ou em tratamento concomitante para distúrbios que afetem a cicatrização ou que possam suprimir o sistema imunológico.
Amostra
Serão incluídos seis pacientes no estudo durante o período de seis meses, em fluxo continuo.
Avaliação Clínica
Na primeira consulta, os pacientes serão submetidos à anamnese, e dados sociodemográficos, incluindo idade, sexo e histórico médico do paciente, serão coletados. A avaliação clínica também será conduzida na primeira consulta, coletando informações relacionadas ao trauma, como: local do trauma, dentes envolvidos, tempo extra-alveolar, meio de armazenamento do dente, período de acompanhamento, desenvolvimento radicular, antibioticoterapia e imunização antitetânica.
Coleta Microbiológica
Amostras para investigação microbiológica serão coletadas da câmara pulpar e dos terços cervical, médio e apical do canal radicular de dentes avulsionados reimplantados. Isso será realizado de acordo com o método descrito por Baumotte et al. (6). A antissepsia do campo será feita após anestesia local e aplicação de isolamento absoluto com dique de borracha (sempre que possível), utilizando digluconato de clorexidina a 2%. Nos casos em que a aplicação do dique de borracha for impraticável, o isolamento do campo será realizado com rolos de algodão estéril e gaze após a antissepsia com digluconato de clorexidina a 2%.
Uma amostra coletada do campo operatório após a antissepsia será utilizada como controle.
O acesso à câmara pulpar será realizado com brocas esféricas estéreis sob irrigação com soro fisiológico estéril, e a coleta será feita com cones de papel estéreis.
A primeira amostra será coletada durante a abordagem da câmara pulpar, e outras três amostras serão coletadas após a penetração desinfetante. Cada espécime será colocado em um tubo de vidro estéril de 5,0 ml contendo 2 ml de solução salina estéril e, em seguida, será imediatamente enviado ao laboratório de microbiologia oral no mesmo edifício.
O tempo de cada coleta não excederá quarenta e cinco minutos, e o tempo entre a coleta e a semeadura em meios de ágar seletivos não excederá quinze minutos.
Cada tubo contendo um cone de papel será colocado em um rotamixer por 30 segundos em capela de fluxo laminar para criar uma suspensão. Em seguida, as amostras serão diluídas 10 vezes em tubos eppendorf estéreis com soro fisiológico estéril, de concentrações de 10⁰ a 10⁻⁴. Após a diluição, cada grupo de concentrações será semeado em meios de ágar seletivos para Enterobactérias (Ágar MacConkey – BD Difco™, Franklin Lakes, NJ USA 07417), para leveduras (Ágar Sabouraud Dextrose - NEOGEN® Corporation, Lasher Place, MI USA 48912), para Estreptococos (Ágar Mitis Salivarius - NEOGEN® Corporation), para Staphylococcus aureus (Ágar Sal Manitol - NEOGEN® Corporation), para Lactobacillus (Ágar Rogosa - BD Difco™), para microrganismos totais (Ágar Sangue Brucella Sheep, suplementado com hemina 10mg.ml⁻¹ e menadiona 1mg.ml⁻¹ – BD Difco™) e para cultura microaerofílica (Ágar Brain-Heart Infusion - NEOGEN® Corporation).
Placas com Ágar MacConkey, Ágar Sabouraud Dextrose, Ágar Sal Manitol e Ágar Sangue Brucella serão incubadas em atmosfera aeróbica por 48 horas a 37ºC e examinadas diariamente. As placas com Ágar Mitis Salivarius, Ágar Rogosa e Ágar BHI serão incubadas por 72 horas a 37ºC em jarras microaerofílicas com geradores microaerofílicos comercialmente disponíveis (ANAEROBAC – Probac, São Paulo, SP, Brasil).
Após a incubação, as Unidades Formadoras de Colônias (UFC) serão contadas, e então a análise microscópica da morfologia e das reações de Gram para cada tipo de colônia diferente será conduzida. As cepas viáveis serão isoladas e cultivadas por 18 horas, sendo então submetidas à análise pelo sistema VITEK 2 (bioMérieux Brasil™ SA, RJ, Brasil).
Para identificação no sistema VITEK 2, as cepas isoladas serão previamente cultivadas em Ágar Trypticase Soy por 18 horas a 37ºC e condições aeróbicas. Após a incubação, um inóculo será preparado de acordo com o valor 0,5 da escala MacFarland, com o auxílio de um espectrofotômetro de bancada (bioMérieux Brasil™ SA). Em seguida, os tubos contendo o inóculo serão conectados ao cartão de identificação ID-GPC (bioMérieux Brasil™ SA), com provas bioquímicas para identificação de cocos aeróbicos Gram-positivos. Finalmente, a leitura do cartão ID-GPC será realizada no equipamento VITEK 2 (bioMérieux Brasil™ SA) por sensores ópticos.
Análise Estatística
Este será um estudo qualitativo-quantitativo, no qual será realizada alguma análise estatística com o SPSS Statistics versão 17.0 (SPSS Inc, Chicago, IL, EUA). Uma análise de variância (ANOVA on ranks) será utilizada para comparações entre grupos e indivíduos, e o teste não paramétrico complementar será o Kruskal-Wallis; algumas descrições baseadas nos casos adequados constituirão a análise qualitativa.
Indicadores, Metas e Resultados
Indicadores:
Número de pacientes elegíveis incluídos: Quantidade de indivíduos que atendem aos critérios de inclusão e participam do estudo.
Número e tipo de microrganismos isolados: Identificação e quantificação das espécies bacterianas e fúngicas encontradas nas amostras.
Perfil de microrganismos predominantes: Quais grupos ou espécies de microrganismos são mais frequentemente isolados em dentes avulsionados reimplantados.
Correlação entre condições clínicas e perfil microbiológico: Análise de como fatores como tempo extra-alveolar, meio de armazenamento e desenvolvimento radicular se relacionam com a microbiota encontrada.
Resultados da identificação bacteriana por VITEK 2: Precisão e confiabilidade das identificações microbianas.
Metas:
Coletar amostras microbiológicas de todos os dentes incluídos de acordo com o protocolo estabelecido: Garantir a conformidade total com os procedimentos de coleta.
Identificar e caracterizar os microrganismos presentes nos canais radiculares dos dentes avulsionados reimplantados: Obter um panorama detalhado da microbiota.
Analisar estatisticamente a relação entre os achados microbiológicos e as características clínicas dos casos: Encontrar possíveis associações e padrões.
Publicar os resultados em um periódico científico revisado por pares: Divulgar as descobertas para a comunidade científica.
Resultados Esperados:
Os resultados esperados são os desfechos que você prevê que seu projeto produzirá. Eles representam o conhecimento e as contribuições que o estudo trará. Para este projeto, os resultados esperados incluem:
Um perfil detalhado da microbiota presente nos canais radiculares de dentes avulsionados e reimplantados: Isso pode revelar se há microrganismos específicos associados a essa condição.
Compreensão sobre a influência de fatores como o tempo extra-alveolar e o meio de armazenamento na composição da microbiota: Identificar quais variáveis clínicas impactam a presença de determinados microrganismos.
Identificação de possíveis patógenos relevantes em casos de avulsão dentária e reimplante: Contribuir para o desenvolvimento de estratégias de tratamento mais eficazes.
Dados que podem auxiliar na otimização de protocolos de desinfecção e antibioticoterapia em dentes avulsionados: Oferecer subsídios para aprimorar a prática clínica.
Publicações científicas que adicionem conhecimento à literatura existente sobre a microbiologia de dentes avulsionados: Fortalecer a base de evidências na área da traumatologia dentária.
Número de pacientes elegíveis incluídos: Quantidade de indivíduos que atendem aos critérios de inclusão e participam do estudo.
Número e tipo de microrganismos isolados: Identificação e quantificação das espécies bacterianas e fúngicas encontradas nas amostras.
Perfil de microrganismos predominantes: Quais grupos ou espécies de microrganismos são mais frequentemente isolados em dentes avulsionados reimplantados.
Correlação entre condições clínicas e perfil microbiológico: Análise de como fatores como tempo extra-alveolar, meio de armazenamento e desenvolvimento radicular se relacionam com a microbiota encontrada.
Resultados da identificação bacteriana por VITEK 2: Precisão e confiabilidade das identificações microbianas.
Metas:
Coletar amostras microbiológicas de todos os dentes incluídos de acordo com o protocolo estabelecido: Garantir a conformidade total com os procedimentos de coleta.
Identificar e caracterizar os microrganismos presentes nos canais radiculares dos dentes avulsionados reimplantados: Obter um panorama detalhado da microbiota.
Analisar estatisticamente a relação entre os achados microbiológicos e as características clínicas dos casos: Encontrar possíveis associações e padrões.
Publicar os resultados em um periódico científico revisado por pares: Divulgar as descobertas para a comunidade científica.
Resultados Esperados:
Os resultados esperados são os desfechos que você prevê que seu projeto produzirá. Eles representam o conhecimento e as contribuições que o estudo trará. Para este projeto, os resultados esperados incluem:
Um perfil detalhado da microbiota presente nos canais radiculares de dentes avulsionados e reimplantados: Isso pode revelar se há microrganismos específicos associados a essa condição.
Compreensão sobre a influência de fatores como o tempo extra-alveolar e o meio de armazenamento na composição da microbiota: Identificar quais variáveis clínicas impactam a presença de determinados microrganismos.
Identificação de possíveis patógenos relevantes em casos de avulsão dentária e reimplante: Contribuir para o desenvolvimento de estratégias de tratamento mais eficazes.
Dados que podem auxiliar na otimização de protocolos de desinfecção e antibioticoterapia em dentes avulsionados: Oferecer subsídios para aprimorar a prática clínica.
Publicações científicas que adicionem conhecimento à literatura existente sobre a microbiologia de dentes avulsionados: Fortalecer a base de evidências na área da traumatologia dentária.
Equipe do Projeto
| Nome | CH Semanal | Data inicial | Data final |
|---|---|---|---|
| JANDRYCE SILVEIRA DE SOUZA | |||
| PEDRO HENRIQUE DE AZAMBUJA CARVALHO | 1 |