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02/08/2010 - 02/08/2015

Ciências Biológicas - Imunologia - Imunologia Aplicada

Os vírus influenza são classificados como vírus tipo A, B ou C, de acordo com as características antigênicas da nucleoproteína viral e das proteínas da matriz. Os vírus tipo A são classificados em diferentes subtipos, de acordo com suas glicoproteínas de superfície, hemaglutinina (HA) e neuraminidase (NA). Existem dezesseis subtipos sorológicos reconhecidos de hemaglutininas do vírus influenza do tipo A (H1 a H16) e nove subtipos de neuraminidases (N1 a N9). Somente três HA (H1, H2 e H3) e duas NA (N1 e N2) foram identificadas entre os vírus pandêmicos e endêmicos comumente associados a infecções em humanos, embora outras variantes, como H5N1, que são tipicamente observadas em outras espécies, causem infecções em humanos que entram em contato com aves contaminadas. Entretanto, a maioria das infecções causadas pelo vírus influenza A em humanos nas últimas décadas tem sido atribuída a somente dois subtipos virais, o H1N1 e o H3N2. As infecções causadas pelos vírus influenza A dos subtipos H1N1, H2N2 e H3N2 e pelos vírus do tipo B normalmente causam um espectro similar de quadros clínicos. No entanto, a freqüência de infecções graves com necessidade de internação ou com complicações fatais é significantemente maior nas infecções causadas pelo influenza A do que nas causadas pelo influenza B. Métodos de diagnóstico rápidos e precisos são essenciais para auxiliar profissionais da saúde a identificar infecções causadas por vírus influenza, a decidir qual o tratamento antiviral inicial é mais adequado e a evitar o uso desnecessário de antibióticos. Embora os métodos disponíveis para diagnóstico do vírus influenza geralmente sejam sensíveis e específicos, eles são laboriosos, demorados, requerem equipamentos especiais, técnicos treinados, reagentes especiais, laboratórios relativamente sofisticados e apresentam custos elevados. O ensaio imunocromatográfico é um método diagnóstico que provê resultados rápidos, não requer ferramentas sofisticadas ou habilidades especiais e é adequado para a detecção de antígenos ou anticorpos. Nessa técnica de imunocromatografia uma membrana de celulose é usada como carreador, e um antígeno ou anticorpo marcado com ouro coloidal é usado como detector (tracer). Esta tecnologia apresenta várias vantagens sobre outros métodos diagnósticos, como rápida e simples operação, obtenção de resultados imediatos, baixo custo, e o não requerimento de técnicos qualificados ou equipamentos sofisticados e caros. Atualmente existem diversos kits baseados no ensaio imunocromatográfico para diagnóstico rápido de influenza disponíveis comercialmente. Entretanto, esses kits são importados e apresentam, consequentemente, um custo muito elevado. Portanto, o objetivo do presente projeto é produzir MAbs específicos para os vírus influenza A e B e desenvolver um kit nacional baseado no ensaio imunocromatográfico para detecção rápida, sensível e específica de influenza A e B. O kit consistirá de um suporte plástico onde a membrana de nitrocelulose será montada. Dois MAbs produzidos (um anti-Influenza A e outro anti-Influenza B) serão conjugados a ouro coloidal e adicionados a membrana para serem utilizados como anticorpos de detecção. Anticorpos anti-Ig de camundongos e outros dois MAbs anti-Influenza A e B serão imobilizados na membrana de nitrocelulose como anticorpos de captura nas linhas controle e teste, respectivamente. O teste será realizado através da imersão da tira em eppendorfs contendo 1 ml da amostra clínica (swab nasal diluído em 1 ml de tampão fosfato). Resultados serão lidos visualmente após 10 a 15 min de incubação a temperatura ambiente e serão considerados positivos (se bandas coloridas estiverem presentes em ambas as linhas controle e teste), negativos (se uma banda colorida estiver presente somente na linha controle) ou inválidos (se nenhuma banda colorida estiver presente ou se uma banda colorida estiver presente somente na linha teste).