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30/04/2014 - 02/05/2018

Ciências da Saúde - Odontologia - Materiais Odontológicos

A transição da regeneração pulpar com células-tronco para a clínica demandará a capacidade de construção de um tecido pulpar que preencha completamente o canal radicular, produza dentina e tenha uma vascularização suficiente para realização das trocas metabólicas teciduais. Esforços para aperfeiçoar a produção de uma vascularização adequada, nos tecidos desenvolvidos por engenharia tecidual, têm sido direcionados à aplicação de fatores pró-angiogênicos para induzir à migração de células progenitoras endoteliais e sua diferenciação. Entretanto, a maior dificuldade encontrada é a indução da migração das células e a definição das doses ideais de fatores de crescimento aplicadas. O objetivo deste estudo será investigar o comportamento de Stem Cells of Human Exfoliated Deciduous Teeth (SHEDs) transfectadas com Vascular Endothelial Growth Factor 121 recombinante (rhVEGF121) com relação à proliferação e diferenciação odontoblástica in vitro e in vivo, e comparar sua capacidade de indução à angiogênese e de formação de tecido pulpar ao das SHED não- transfectadas. SHEDs serão cultivadas, e transfectadas com vetor adenoviral contendo rhVEGF121 (SHED/ rhVEGF121) e logo após semeadas em scaffolds injetáveis a base de hidrogeis anfifilicos (RADA 16) para que sua morfologia (MEV), taxa de proliferação (WST1), produção de VEGF e potencial mitogênico sobre células de origem endotelial (HDMEC) sejam avaliados. Para determinar a viabilidade e potencial de diferenciação de SHED in vitro, raízes de pré-molares não instrumentadas serão posicionadas com o ápice em meio de cultura. SHED ressuspendidas em RADA 16 serão injetadas nos canais (n=24, 5X105 células/ml). Os controles serão SHED e scaffolds sem células semeadas. Marcadores para diferenciação odontoblástica (DSPP, DMP-1 e MEPE) serão avaliados semanalmente (n=6) por RT-PCR durante 28 dias. Para avaliar a diferenciação odontoblástica e formação de tecido in vivo, SHED, SHED/ rhVEGF121 e SHED/rhVEGF121 LACZ+ serão injetadas em canais radiculares (n=8, 106 células/ml). Serão realizados implantes subcutâneos em camundongos imunodeprimidos. O controle (C+) será um pré-molar humano extraído para tratamento endodôntico. A neoformação dentinária será demonstrada com injeções de tetraciclina hidroclorada nos camundongos (a cada cinco dias).