Nome do Projeto
Engenharia de tecido Pulpar a partir de células-tronco de dentes decíduos transfectadas ex-vivo com VEGF
Ênfase
PESQUISA
Data inicial - Data final
30/04/2014 - 02/05/2018
Unidade de Origem
Área CNPq
Ciências da Saúde - Odontologia - Materiais Odontológicos
Resumo
A transição da regeneração pulpar com células-tronco para a clínica demandará a capacidade de construção de um tecido pulpar que preencha completamente o canal radicular, produza dentina e tenha uma vascularização suficiente para realização das trocas metabólicas teciduais. Esforços para aperfeiçoar a produção de uma vascularização adequada, nos tecidos desenvolvidos por engenharia tecidual, têm sido direcionados à aplicação de fatores pró-angiogênicos para induzir à migração de células progenitoras endoteliais e sua diferenciação. Entretanto, a maior dificuldade encontrada é a indução da migração das células e a definição das doses ideais de fatores de crescimento aplicadas. O objetivo deste estudo será investigar o comportamento de Stem Cells of Human Exfoliated Deciduous Teeth (SHEDs) transfectadas com Vascular Endothelial Growth Factor 121 recombinante (rhVEGF121) com relação à proliferação e diferenciação odontoblástica in vitro e in vivo, e comparar sua capacidade de indução à angiogênese e de formação de tecido pulpar ao das SHED não- transfectadas. SHEDs serão cultivadas, e transfectadas com vetor adenoviral contendo rhVEGF121 (SHED/ rhVEGF121) e logo após semeadas em scaffolds injetáveis a base de hidrogeis anfifilicos (RADA 16) para que sua morfologia (MEV), taxa de proliferação (WST1), produção de VEGF e potencial mitogênico sobre células de origem endotelial (HDMEC) sejam avaliados. Para determinar a viabilidade e potencial de diferenciação de SHED in vitro, raízes de pré-molares não instrumentadas serão posicionadas com o ápice em meio de cultura. SHED ressuspendidas em RADA 16 serão injetadas nos canais (n=24, 5X105 células/ml). Os controles serão SHED e scaffolds sem células semeadas. Marcadores para diferenciação odontoblástica (DSPP, DMP-1 e MEPE) serão avaliados semanalmente (n=6) por RT-PCR durante 28 dias. Para avaliar a diferenciação odontoblástica e formação de tecido in vivo, SHED, SHED/ rhVEGF121 e SHED/rhVEGF121 LACZ+ serão injetadas em canais radiculares (n=8, 106 células/ml). Serão realizados implantes subcutâneos em camundongos imunodeprimidos. O controle (C+) será um pré-molar humano extraído para tratamento endodôntico. A neoformação dentinária será demonstrada com injeções de tetraciclina hidroclorada nos camundongos (a cada cinco dias).

Objetivo Geral

Geral
Investigar a capacidade de proliferação, diferenciação e liberação de VEGF das SHEDs
transfectadas com rhVEGF121, além comparar seu potencial angiogênico e de neoformação de tecido pulpar ao das células tronco não-transfectadas (Miura et al., 2003).
Específicos
 Realizar, in vitro, a transfecção e avaliação da viabilidade e proliferação das SHED
transfectadas com rhVEGF121;
 Preparar os Scaffolds Injetáveis (RADA-16), para o cultivo inicial das SHED
transfectadas com rhVEGF121;
 Avaliar a taxa de transfecção ideal no sistema de co-transfecção HEK293 como sistema celular de hiperprodução em diferentes MOIs (0, 5, 10, 20, 50 e 100);
 Avaliar a morfologia celular por Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV);
 Avaliar a liberação de VEGF e diferenciação odontoblástica das células in vitro;
 Avaliar a atividade mitogênica das SHED transfectadas sobre células de origem
endotelial;
 Avaliar a capacidade de diferenciação em linhagens odontoblásticas, in vitro, em
canais de pré-molares humanos;
 Avaliar a capacidade das SHED transfectadas em produzir tecido pulpar funcional in
vivo,
 Realizar a análise histológica e imunoistoquímica dos tecidos pulpares produzidos In
Vivo. A partir destas análises, comparar o tecido formado pelas células transfectadas
com o tecido formado pelas células controle.

Equipe do Projeto

NomeCH SemanalData inicialData final
BHÁRBARA MARINHO BARCELLOS619/05/201401/05/2015
BRUNA DA SILVA BARRAGANA VERA1201/08/201531/07/2016
JOSÉ CARLOS BERNEDO ALCAZAR219/05/201401/05/2018
JÚLIO CÁ1201/08/201431/07/2015
JÚLIO CÁ619/05/201401/05/2015
LUIZ ALEXANDRE CHISINI819/05/201401/05/2016
MABEL MILUSKA SUCA SALAS219/05/201401/05/2018
MARCUS CRISTIAN MUNIZ CONDE1001/05/201401/05/2018
MIGUEL KONRADT MASCARENHAS1201/06/201731/07/2017
RODRIGO VARELLA DE CARVALHO1026/05/201401/05/2018
SANDRA BEATRIZ CHAVES TARQUINIO204/05/201401/05/2018
SARAH ARANGUREM KARAM1201/11/201431/07/2015
THAIS GIODA NORONHA1201/08/201631/05/2017
THAIS GIODA NORONHA1201/08/201531/07/2016
VINICIUS FARIAS CAMPOS201/05/201401/05/2018

Fontes Financiadoras

Sigla / NomeValorAdministrador
CNPqR$ 206.000,00

Página gerada em 11/12/2018 13:54:46 (consulta levou 0.075770s)