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01/09/2016 - 03/09/2018

Ciências Biológicas - Bioquímica

A proteína p53 é um fator de transcrição considerado componente principal para a manutenção do equilíbrio celular e mutações nessa proteína são detectadas em aproximadamente 50% dos tumores humanos. Como conseqüência dessas mutações, acúmulos de proteína p53 afuncional são detectados em células cancerosas, sendo sugerido que esse acúmulo anormal de proteína nas células seja um alvo apropriado para imunoterapia de tumores. O câncer de bexiga é o quarto tipo de tumor mais freqüente em homens e o oitavo mais freqüente em mulheres. A imunoterapia utilizando Bacillus Calmeth-Guerin (BCG), apesar de apresentar diversas limitações, é atualmente um dos tratamentos de maior eficácia contra câncer superficial de bexiga. Este trabalho tem como objetivo principal a construção de um bacilo BCG recombinante que expresse a proteína p53, visando avaliar sua utilização para imunoterapia de câncer superficial de bexiga. Serão utilizadas três cepas bacterianas neste trabalho: Escherichia coli DH5, Mycobacterium bovis BCG Pasteur, e M. bovis BCG ∆leuD. Um bacilo BCG recombinante capaz de expressar a proteína p53 (rBCG/p53) será construído utilizando-se vetores de expressão ligados ao inserto contendo a seqüência do gene p53. As moléculas recombinantes construídas serão utilizadas para transformar células competentes de E.coli DH5 por eletroporação, sendo seu DNA plasmidial posteriormente utilizado para transformação das cepas de BCG. A avaliação da expressão de p53 em rBCG/p53 será feita por Western Blotting e Northern Blotting. O potencial imunoterápico da molécula rBCG/p53 será avaliado através de análise do crescimento in vitro de linhagem de carcinoma humano de bexiga; e pela avaliação da resposta imune humoral obtida após injeções de rBCG/p53 em camundongos Balb/c, através do teste de ELISA. Sendo assim, espera-se que através da administração de BCG recombinante para a proteína p53 em linhagem tumoral de câncer superficial de bexiga e em camundongos se obtenha, respectivamente, diminuição do crescimento tumoral in vitro, e estímulo da resposta imune Th1 in vivo.