Adição de ácido eicosapentaenoico (EPA) e ácido docosahexaenoico (DHA) ao sêmen de equinos

Nome do Projeto

Ênfase

PESQUISA

Data inicial - Data final

01/03/2018 - 31/12/2019

Unidade de Origem

Instituto de Biologia

Coordenador Atual

SANDRA MARA DA ENCARNACAO FIALA RECHSTEINER

Área CNPq

Ciências Agrárias - Medicina Veterinária

Resumo

Contornar os efeitos deletérios que o processo de criopreservação causa e, consequentemente, melhorar os parâmetros espermáticos pós-criopreservação, significa ampliar os resultados obtidos através da inseminação artificial com uso de sêmen congelado/descongelado e tornar o uso desta biotécnica em larga escala. Tais progressos ligados à eficiência reprodutiva estão diretamente relacionados a ganhos produtivos e intensificação de melhoramento genético dos animais, sendo de extrema importância para a continuação do crescimento da indústria equina e, mais especificamente, da raça Crioula. Serão realizadas quatro coletas de quatro garanhões da raça Crioula clinicamente saudáveis e com histórico de fertilidade normal. A coleta de sêmen será realizada com vagina artificial, sendo feita a avaliação imediata do sêmen. Ejaculados com motilidade total ≥60% e vigor ≥3, além de concentração espermática média de 100-200x10⁶/ml e espermatozoides sem alterações ≥70% (CBRA, 2013) serão diluídos na proporção 1:1 em Botu-Sêmen (Botupharma), e um total de 1.200x10⁶ espermatozoides viáveis será centrifugado em tubos Falcon a 600 x g por 10 m. O sobrenadante será desprezado e o pellet ressuspendido em Botu-Crio (Botupharma) de modo a ajustar a concentração para 200x10⁶ espermatozoides viáveis/ml, previamente aquecido a 37ºC. Posteriormente, os seguintes tratamentos serão adicionados ao sêmen diluído em Botu-Crio (2 ml/tratamento): Controle (n=16); EPA25 (n=16): 25µm EPA/ml, DHA25 (n=16): 25µm DHA/ml, EPA50 (n=16): 50µm EPA/ml, DHA50 (n=16): 50µm DHA/ml; e DHA100 (n=16): 100µm DHA/ml. Palhetas de 0,5 ml serão envasadas (100x10⁶ espermatozoides viáveis/palheta) e congeladas em nitrogênio líquido. Após o descongelamento serão realizadas análises microscópicas no sistema CASA (Computer Assisted Sperm Analysis, AndroVision®), a avaliação da integridade física da membrana será realizada utilizando-se sondas fluorescentese (iodeto de propídio e diacetato de carboxifluoresceína) e a integridade funcional da membrana será avaliada por meio do teste hiposmótico. A análise estatística será realizada através de analise de variância utilizando o programa SPSS Statistics, sendo considerada diferença significativa nos valores de P<0,05.

Objetivo Geral

Objetivo geral:
Determinar o efeito da adição de EPA e DHA em meio diluente de sêmen específico para a espécie sobre a viabilidade espermática de garanhões da raça Crioula durante a criopreservação.
Objetivos específicos:
• Buscar alternativas de crioprotetores para a criopreservação de sêmen equino.
• Avaliar in vitro a viabilidade do sêmen de garanhões da raça Crioula, submetidos à criopreservação e diluição em meio especifico para a espécie equina suplementado com diferentes tipos de PUFAs (EPA e DHA).
• Verificar o efeito da adição de EPA, DHA sobre a qualidade seminal equina após processo de criopreservação.
• Analisar a cinética espermática pós-criopreservação por meio de sistema de analise computadorizada para avaliação espermática (CASA) e citometria de fluxo;
• Analisar a capacidade da EPA, DHA, em manter integridade funcional e física da membrana plasmática.

Equipe do Projeto

Nome	CH Semanal	Data inicial	Data final
ALINNE MACHADO PETRARCA LÉO	2	01/03/2018	31/12/2019
CAROLINA BICCA NOGUEZ MARTINS BITENCOURT	2	01/03/2018	31/12/2019
LIDIA DUTRA FARIAS	2	01/03/2018	31/12/2019
MARIANA VILELA KAISER	2	01/03/2018	31/12/2019