Portal InstitucionalUFPEL

01/08/2018 - 01/08/2019

Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Reprodução Animal

O estabelecimento de linhagens celulares pluripotentes em suínos, bovinos e outros animais domésticos é de grande interesse para a produção animal e para a aplicação em biomedicina. Os estudos envolvendo a Transferência Nuclear (NT) foram os primeiros a demonstrar que o citoplasma de oócitos enucleados são aptos a reprogramar a cromatina de células diferenciadas até o estágio de célula tronco embrionária. A ativação de genes associados à pluripotência por componentes do citoplasma de oócitos, incluindo fatores de transcrição e outras proteínas, remodela as estruturas nucleares das células somáticas, fazendo com que elas adquiram características semelhantes às de células de embriões em estágios iniciais de desenvolvimento. Recentemente, vários grupos relataram a indução forçada de pluripotência em fibroblastos humanos em estudos conduzidos para a geração de células-tronco pluripotentes induzidas (iPSCs – Induced pluripotent stem cells, em inglês). Esta tecnologia baseia-se na transdução de vetores virais expressando os genes OCT4, C-MYC, KLF4 e SOX2 em células somáticas. Uma vez que pode oferecer uma fonte ilimitada de células com potencial promissor para o estudo de doenças, uso em terapia celular e medicina regenerativa, a estratégia de iPSCs tem despertado a busca por outras alternativas de indução de pluripotência em células somáticas. Assim, a exposição de fibroblastos cultivados in vitro e previamente permeabilizados, a extratos de citoplasma de oócitos de diferentes espécies, tem sido proposta como uma alternativa para a geração de células-tronco-funcionais, dispensando a utilização de transgenes retrovirais. Tendo em vista que a reprogramação nuclear de células somáticas de mamíferos a partir de extratos citoplasmáticos tanto autólogos, quanto heterólogos, já foi demostrada, este trabalho tem como objetivo a obtenção de colônias de células-tronco pluripotentes bovinas induzidas, a partir da reprogramação de fibroblastos cultivados in vitro com extratos citoplasmáticos de oócitos suínos. A vantagem da utilização deste tipo de reprogramação proposta, é a de que oócitos estão disponíveis em maior número nos ovários de fêmeas suínas, em comparação com o número de oócitos disponíveis nos ovários de fêmeas bovinas. O efeito do cito-extrato sobre a morfologia dos fibroblastos, o número de colônias obtidas, assim como a expressão de genes marcadores de pluripotência, e a atividade de fosfatase alcalina, serão avaliados.