Nome do Projeto
Efeitos da inflamação na fertilidade de bovinos: Desafio com lipopolissacarídeos em oócitos e efeito da lipoproteína de alta densidade sobre a maturação oocitária e desenvolvimento embrionário inicial em bovinos
Ênfase
PESQUISA
Data inicial - Data final
03/09/2018 - 07/09/2020
Unidade de Origem
Coordenador Atual
Área CNPq
Ciências Biológicas - Fisiologia
Resumo
Em bovinos leiteiros 75% das doenças acontecem no primeiro mês após o parto, nesse período os animais atravessam por diversas mudanças metabólicas e endócrinas, o que em consequência pode alterar a capacidade do organismo do animal em responder frente a possíveis infeções. Quando ocorre uma infecção, diversos mediadores inflamatórios são ativados e/ou sintetizados com o objetivo de sinalizar, ativar células imunes e combater o patógeno. Um dos principais agentes causadores de infeções é a bactéria gram-negativa Escherichia coli (E. coli), quem possui na sua parede celular um componente tóxico denominado Lipopolissacarídeo (LPS), capaz de desencadear uma forte resposta inflamatória e imune. O objetivo geral do projeto é estudar os mecanismos pelos quais o LPS, decorrente de infecções que acometem a bovinos leiteiros pode afetar a fertilidade, assim como estudar a relação do complexo HDL-APOA1-PON1 com a fertilidade. Para isso o projeto será divido em dois experimentos: 1) Oócitos bovinos serão aspirados de ovários provenientes de abatedouros, selecionados e maturados in vitro (n = 50 oócitos/grupo) com diferentes concentrações de HDL e LPS e será avaliada a taxa de desenvolvimento embrionário e 2) Será sincronizada a onda folicular de 16 novilhas de raça europeia e divididas em dois grupos, o grupo LPS receberá duas doses de LPS i.v. com intervalo de 24 horas e o grupo controle receberá da mesma forma 2 mL de solução salina i.v. Todos os animais serão abatidos no quinto dia do protocolo de sincronização, coletados os ovários e recuperados os oócitos. Os oócitos serão contados, selecionados, maturados in vitro, fecundados e cultivados in vitro por sete dias. Será avaliado o número de oócitos recuperados por animal, taxa de clivagem e taxa de blastocisto, assim como o número total de células nos embriões ao sétimo dia de cultivo.
Objetivo Geral
2. Objetivos
O objetivo geral do projeto é estudar os mecanismos pelos quais o LPS, decorrente de infecções que acometem a bovinos leiteiros pode afetar a fertilidade, assim como estudar a relação do complexo HDL-APOA1-PON1 com a fertilidade.
2.1 Objetivos específicos
- Mimetizar as concentrações intrafoliculares de LPS de animais acometidos com metrite e avaliar seu efeito sobre a maturação oocitária in vitro;
- Verificar o efeito de doses crescentes de LPS durante a maturação in vitro de oócitos bovinos sobre a taxa de maturação nuclear, taxa de clivagem e desenvolvimento embrionário inicial;
- Determinar o efeito do LPS durante a maturação oocitária in vitro sobre os níveis intracelulares de Glutationa e espécies reativas de oxigênio;
- Avaliar o efeito do desafio com LPS in vivo em oócitos maturados e cultivados in vitro, sobre o desenvolvimento embrionário inicial;
- Mensurar as concentrações de LPS sanguíneas e intrafoliculares de animais desafiados com LPS;
- Avaliar o efeito do desafio com LPS in vivo sobre as concentrações de HDL-C, PON1 e ApoAI séricas e intrafoliculares;
- Determinar o efeito do HDL durante a maturação oocitária in vitro sobre a taxa de maturação nuclear e taxa de clivagem;
- Verificar o efeito da adição de HDL durante a maturação oocitária in vitro sobre o desenvolvimento embrionário inicial;
- Verificar as possíveis rotas de ação do HDL a nível de oócito e embrião, através de análises de expressão de gênica.
O objetivo geral do projeto é estudar os mecanismos pelos quais o LPS, decorrente de infecções que acometem a bovinos leiteiros pode afetar a fertilidade, assim como estudar a relação do complexo HDL-APOA1-PON1 com a fertilidade.
2.1 Objetivos específicos
- Mimetizar as concentrações intrafoliculares de LPS de animais acometidos com metrite e avaliar seu efeito sobre a maturação oocitária in vitro;
- Verificar o efeito de doses crescentes de LPS durante a maturação in vitro de oócitos bovinos sobre a taxa de maturação nuclear, taxa de clivagem e desenvolvimento embrionário inicial;
- Determinar o efeito do LPS durante a maturação oocitária in vitro sobre os níveis intracelulares de Glutationa e espécies reativas de oxigênio;
- Avaliar o efeito do desafio com LPS in vivo em oócitos maturados e cultivados in vitro, sobre o desenvolvimento embrionário inicial;
- Mensurar as concentrações de LPS sanguíneas e intrafoliculares de animais desafiados com LPS;
- Avaliar o efeito do desafio com LPS in vivo sobre as concentrações de HDL-C, PON1 e ApoAI séricas e intrafoliculares;
- Determinar o efeito do HDL durante a maturação oocitária in vitro sobre a taxa de maturação nuclear e taxa de clivagem;
- Verificar o efeito da adição de HDL durante a maturação oocitária in vitro sobre o desenvolvimento embrionário inicial;
- Verificar as possíveis rotas de ação do HDL a nível de oócito e embrião, através de análises de expressão de gênica.
Equipe do Projeto
| Nome | CH Semanal | Data inicial | Data final |
|---|---|---|---|
| ANDRESSA STEIN MAFFI | 1 | 03/09/2018 | 07/09/2020 |
| ANTÔNIO AMARAL BARBOSA | 1 | 03/09/2018 | 07/09/2020 |
| BRUNA MION | 1 | 03/09/2018 | 07/09/2020 |
| JOAO ALVEIRO ALVARADO RINCON | 6 | 03/09/2018 | 07/09/2020 |
| MARCIO NUNES CORREA | 1 | 03/09/2018 | 07/09/2020 |
| PATRÍCIA CARVALHO GINDRI | 1 | 03/09/2018 | 07/09/2020 |
Fontes Financiadoras
| Sigla / Nome | Valor | Administrador |
|---|---|---|
| CAPES/PROAP | R$ 2.000,00 |