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18/04/2019 - 31/07/2021

Ciências Biológicas - Parasitologia - Helmintologia Animal

Resumo: O nematódeo Dioctophyma renale é conhecido como o “verme gigante” do rim, pois parasita, principalmente, o rim direito de carnívoros domésticos e silvestres e, ocasionalmente, de humanos. O diagnóstico da dioctofimatose é estabelecido por meio de ultrassom e exame de urina. Contudo, muitas vezes o diagnóstico ocorre de forma acidental em cirurgias ou durante necropsias. Apesar disso, alguns estudos epidemiológicos no sul do Brasil, com destaque para a cidade de Pelotas, observaram significativa frequência de animais parasitados, assim como a presença de ovos contaminando o ambiente urbano. Em virtude da presença desse parasito em nosso meio e das dificuldades na realização de forma eficaz de diagnóstico, evidencia-se a necessidade de estudos que visem estabelecer novas técnicas de diagnóstico dessa parasitose. Sendo assim, o objetivo desse trabalho será desenvolver e padronizar técnicas de imunodiagnóstico para Dioctophyme renale e compara-las com técnicas parasitológicas e de imagem. Para isso, cães parasitados com D. renale serão encaminhados ao HCV-UFPel para a realização dos procedimentos cirúrgicos de nefrectomia e/ou laparotomia exploratória. Os parasitos adultos obtidos serão separados por sexo, incubados em HEPES e mantidos em estufa de CO2 para obtenção do antígeno de excreção e secreção (DES). O antígeno somático de esôfago será obtido de parasitos adultos DEA, os esôfagos serão processados em TenBrok, sonicador e centrifugação, sendo o sobrenadante obtido, dialisado e liofilizados. Os antígenos serão avaliados pela técnica de SDS-PAGE para determinar bandas e pesos moleculares das proteínas presente. O método ELISA será padronizado utilizando o antígeno DES e DEA D. renale. Nos soros positivos no ELISA, será utilizada a técnica “Western blotting” para verificar o reconhecimento das bandas identificadas no SDS PAGE pelos soros dos cães parasitados. Para a avaliação de imagem os animais passarão por exame de ultrassonografia abdominal e na pesquisa parasitológica será realizado exame de urina, obtida por micção natural, pela técnica de centrífugo-sedimentação. A partir dos resultados será realizada a avaliação das diferentes técnicas utilizadas. O estabelecimento do cultivo in vitro do Dioctophyma renale, possibilitará a produção de antígeno desse parasito e assim, obter um teste de imunológico que viabilizará não somente o diagnóstico, mas também implementar pesquisas epidemiológicas, imunológicas e moleculares sobre este nematódeo.