Portal InstitucionalUFPEL

Tendo em vista a alta casuística de otites em cães, existe a necessidades de produtos com menos efeitos deletérios, menor custo e redução da frequência de uso, assim o desenvolvimento de novos produtos com base em extratos vegetais em adjuvantes são uma alternativa viável para o tratamento da otite externa em cães.

Obtenção dos extratos vegetais e fitoterápicos As amostras vegetais utilizadas para produção dos extratos serão adquiridas comercialmente de uma empresa distribuidora de produtos naturais, com certificação de origem das sementes e ficha técnica. Para compor o produto foram produzidos extratos oleosos e etanoicos das plantas Bixa orellana e Triticum aestivum. Para a obtenção dos extratos etanoicos, as sementes serão pulverizadas em moinho de facas sendo pesadas e acondicionadas em um balão de Erlenmeyer e, adicionado Etanol PA ao balão e este levado ao ultrassom e sonificado por 30 minutos. Ao final da extração os extratos de ambas as plantas foram filtrados em rotaevaparodor para retirar o solvente. Após a extração os extratos serão armazenados em frascos âmbar hermeticamente fechados e conservados a -4ºC até sua utilização.
Confecção dos produtos Para a formulação do composto LCFO 1003 serão utilizados os extratos etanólicos de trigo e urucum juntamente com o adjuvante TRIS EDTA, já para o composto LCFO 1004 serão utilizados os extratos etanólicos de urucum e trigo juntamente com o adjuvante N-acetilcisteína, para o grupo controle será utilizado um produto comercial de tratamento otológico.
Estudo experimental em cães Serão incluídos neste estudo 45 cães jovens e adultos, com orelhas pendulares e semi-pendulares, sem raça definida de ambos os sexos com sinais clínicos de otite externa apresentando na citologia a presença de bactérias ou leveduras. São excluídas do estudo as fêmeas gestantes, otite externa de origem parasitária, cães com estenose de conduto e com presença de massas nodulares no conduto auditivo externo. Este estudo foi aprovado pela comissão de ética em experimentação animal (CEEA Nº 9055/UFPEL).
Tratamentos tópicos Os cães naturalmente acometidos por otite externa serão divididos em três grupos de forma aleatória conforme o tratamento. Os animais serão tratados uma vez a cada 24 horas durante 7 dias consecutivos, sempre pela mesma equipe previamente treinada e cega quanto aos tratamentos. A cada 24 horas, o conduto auditivo será previamente limpo com o próprio produto com auxilio de gaze e após serão aplicadas quatro gotas para cães com até de 15kg e oito gotas para cães com mais de 15kg. Todos os animais serão avaliados antes do tratamento (D0), no terceiro (D3) e sétimo (D7) dias de tratamentos. Serão realizadas a inspeção e palpação do conduto auditivo, sendo observados a morfologia do conduto a qual foi classificada como pendular e semi-pendular, sinais clínicos de otalgia e prurido os quais foram classificados como ausente (0) leve (1) moderado (2) intenso (3), e o reflexo otopodal será classificado como ausente (0) presente (1). Será realizada a otoscopia, sendo analisados os sinais clínicos de eritema o qual foi classificado de acordo com uma escala de cores em ausente (0), leve (1), moderado (2) e intenso (3), quantidade de cerúmen a qual será avaliada de acordo com o grau de obstrução do cone do otoscópio sendo classificada como leve (0), moderado (1) e grave (2). Também serão observadas presença de lesões ausente (0) presente (2) e estenose ausente (0) presente (2). Após a avaliação, cada sinal clínico receberá uma pontuação em escore de 0 a 3, o qual 0 era considerado ausente e 3 a forma mais grave de aparecimento, a partir desta pontuação será gerado um somatório por animal e por grupo durante cada dia de avaliação. Após a avaliação otoscópica será aferida a temperatura auditiva com termômetro Geratherm Rapid ® e coletadas amostras para citologia, micologia e bacteriologia.
Citologia Para a citologia os swabs serão rolados sobre lâminas de vidro e corados com panotico rápido e secas. Após serão avaliadas no aumento de 1000x, sendo visualizados 5 campos microscópicos para presença de bactérias (cocos ou bacilos), leveduras e células inflamatórias
Cultura bacteriana As amostras do conduto autidivo colhidas em swab estéril serão semeadas em placas de Petri contendo ágar sangue e ágar MacConkey e serão incubadas em estufa bacteriológia a uma temperatura de 37º durante 48 horas. O crescimento bacteriano será submetido a coloração de gram. Conforme a observação morfológica e de coloração das bactérias serão realizados testes bioquímicos para a classificação das bactérias.
Cultura Fúngica Para o isolamento as amostras serão cultivadas em ágar saboraud acrescidas de cloranfenicol e mantidas em estufa microbiológica há uma temperatura de 37ºC durante 48 horas e posteriormente será realizada a citologia das colônias que apresentaram crescimento para confirmar o isolamento da levedura Malassezia pachydermatis
Análise estatística Para as análises estatísticas será utilizado o software SPSS ® 20.0, considerando um nível mínimo de significância de 95%. Todos os grupos serão comparados entre si utilizando o teste de Kruskal-Wallis. Para a avaliação da temperatura auditiva entre os grupos será utilizado ANOVA e para citologia será utilizado teste de Tukey e para a analise da redução dos microrganismos será o teste de McNermar.

Espera-se que o uso dos compostos estudado demonstrem eficácia para a otite canina. Assim se tem como meta o desenvolvimento dos compostos otológicos com os extratos vegetais e os adjuvantes; a utilização dos compostos nos cães com otite, demionstrando a diminuição dos sinais clínicos e o efeito antimicrobiano.