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A leptospirose é uma das doenças zoonóticas mais difundidas mundialmente. O desenvolvimento de uma vacina efetiva contra diferentes sorovares leptospirais promoverá significativo impacto na saúde pública, na produção e bem estar animal. Com este projeto, buscamos caracterizar a capacidade de proteção heteróloga e indução da resposta imune por duas formulações recombinantes com bons resultados frente a desafio homólogo. Com os resultados que serão obtidos esperamos validar as vacinas alvo deste estudo, contribuindo para o desenvolvimento de um produto com inovação tecnológica capaz de impactar positivamente a saúde humana e animal. Este projeto fará parte de uma dissertação de mestrado. Além disso, a execução do projeto possibilitará a formação de recursos humanos e a produção de conhecimento que será divulgado através de artigos científicos, patentes e de outros meios de divulgação científica.

Nos dias 0 e 21, nos grupos correspondentes serão administradas duas doses das formulações vacinais BCG Pasteur ou rBCG contendo cada uma 106 UFC pela via subcutânea, e da bacterina contendo 109 células de Leptospira spp. pela via intramuscular.Cada grupo será desafiado intraperitonealmente cinquenta e um dias após a primeira dose conforme descrito por OLIVEIRA et al 2021, utilizando uma dose de 100 x a DL50 de cada cepa de Leptospira. Para obtenção do soro, coletas de sangue serão conduzidas durante os períodos pré e pós imune nos dias 0, 21 e 51 por punção de veia gengival usando anestesia com isoflurano, e os soros serão posteriormente separados e armazenados a -20 ° C. Após o desafio, os animais serão monitorados diariamente durante 30 dias, a fim de se acompanhar e registrar os possíveis sinais clínicos de leptospirose. Conforme as normas e regulamentos do Comitê de Ética em Experimentação Animal (CEEA), animais moribundos serão eutanasiados por inalação de CO2. Os critérios adotados para determinação da eutanásia serão perda de 10% do peso máximo, hematúria, sangramento nasal, prostração, pelo eriçado, apatia e falta de apetite. Animais sobreviventes 30 dias pós desafio serão eutanasiados pelo mesmo método. Serão realizadas análises histopatológicas de amostras de tecido renal, hepático e pulmonar dos animais sobreviventes, assim como avaliação da proteção contra colonização renal através de PCR quantitativo em tempo real e cultura dos rins em meio EMJH. A resposta imune humoral será avaliada através de ELISA e a proteção contra mortalidade e as taxas de sobrevivência serão determinadas usando teste exato de Fisher e teste de log-rank.

Caracterizar o potencial imunoprotetor de vacinas baseadas em BCG recombinante contra
leptospirose através de desafio heterólogo em hamsters. Determinar a capacidade dessas vacinas de
conferir imunidade cruzada contra diferentes sorovares da bactéria, atendendo a uma problemática
amplamente relatada na literatura em relação as bacterinas, vacinas convencionais que são
sorovar-específicas. Além disso, proporcionar o aumento do conhecimento referente ao
desenvolvimento de vacinas vetorizadas por BCG contra a leptospirose, resultando em pelo menos
um artigo científico veiculado em periódico de circulação internacional e em resumos divulgados em
congressos científicos. Este projeto também possibilitará o treinamento e a qualificação de alunos de
graduação e pós-graduação no decorrer de seu período de atividades.