Nome do Projeto
Produção e caracterização de citocinas recombinantes e anticorpos monoclonais para análise da resposta imune celular em hamster sírio dourado (Mesocricetus auratus)
Ênfase
Pesquisa
Data inicial - Data final
30/10/2024 - 30/10/2028
Unidade de Origem
Coordenador Atual
Área CNPq
Multidisciplinar
Resumo
O hamster sírio (Mesocricetus auratus) é suscetível a uma variedade de patógenos, sendo um excelente modelo para várias doenças humanas. No entanto, a falta de reagentes disponíveis para essa espécie limitam análises de resposta imunológica, especialmente no que se refere à determinação da concentração sérica de moléculas efetoras, como citocinas. Apesar da identidade de sequência de algumas citocinas ser alta (> 90%) entre diferentes espécies de roedores, kits de ELISA disponíveis para quantificação sérica dessas proteínas em ratos e camundongos já demonstraram não ter eficácia confiável para serem utilizados com amostras de hamster. Assim sendo, nesse projeto pretende-se clonar e expressar citocinas de hamster na forma recombinante e produzir anticorpos contra as mesmas, a fim de se obter insumos que possam ser usados na análise de imunidade celular nesse modelo animal.
Objetivo Geral
Produção e caracterização de citocinas de hamster sírio dourado na forma recombinante, em diferentes sistemas de expressão, bem como anticorpos monoclonais contra as mesmas citocinas, visando a sua utilização no desenvolvimento de imunoensaios para avaliação da resposta imune celular neste modelo animal.
Justificativa
O projeto se justifica pela importância do hamster como modelo animal na pesquisa científica e pela ausência de reagentes disponíveis para caracterizar a resposta imune celular neste organismo, a qual representa uma etapa fundamental no desenvolvimento de vacinas, terapias e no estudo da patogênese de diferentes enfermidades.
Metodologia
- Clonar as sequências codificadoras das citocinas em vetores de expressão em E. coli, células CHO-K1 e levedura Komagataella phaffii;
- Expressar e purificar as citocinas na forma recombinante a partir dos sistemas de expressão mencionados;
- Caracterizar as proteínas recombinantes obtidas nas diferentes células hospedeiras quanto ao seu
rendimento, identidade, atividade e padrão de glicosilação;
- Produzir e caracterizar anticorpos monoclonais contra as citocinas recombinantes;
- Avaliar a sensibilidade e especificidade dos anticorpos produzidos em ensaios de ELISA e Western blot;
- Desenvolver ensaio de ELISA sanduíche para detecção das citocinas em amostras de hamster sírio dourado usando os reagentes produzidos.
- Expressar e purificar as citocinas na forma recombinante a partir dos sistemas de expressão mencionados;
- Caracterizar as proteínas recombinantes obtidas nas diferentes células hospedeiras quanto ao seu
rendimento, identidade, atividade e padrão de glicosilação;
- Produzir e caracterizar anticorpos monoclonais contra as citocinas recombinantes;
- Avaliar a sensibilidade e especificidade dos anticorpos produzidos em ensaios de ELISA e Western blot;
- Desenvolver ensaio de ELISA sanduíche para detecção das citocinas em amostras de hamster sírio dourado usando os reagentes produzidos.
Indicadores, Metas e Resultados
Obtenção e caracterização de pelo menos 5 citocinas recombinantes a partir de diferentes sistemas de expressão; Produção e caracterização de anticorpos contra pelo menos 5 citocinas recombinantes; Desenvolvimento de ELISA sanduíche para detecção de pelo menos 2 citocinas alvo em amostras de hamster.
Equipe do Projeto
| Nome | CH Semanal | Data inicial | Data final |
|---|---|---|---|
| ANA CAROLINA KURZ PEDRA | |||
| ANAEL DA LUZ MOREIRA | |||
| BEATRIZ CAMPOS DA MOTTA SANTOS | |||
| GABRIEL SAN MARTINS KUNDE | |||
| LAURA DE VARGAS MAIOCCHI | |||
| MARA ANDRADE COLARES MAIA | |||
| NATASHA RODRIGUES DE OLIVEIRA | |||
| ODIR ANTONIO DELLAGOSTIN | 2 | ||
| PEDRO HENRIQUE FILGUEIRAS COELHO SOUZA | |||
| THAIS LARRÉ OLIVEIRA BOHN | 2 |