Nome do Projeto
Avaliação do reposicionamento de fármacos anticoccídeos em Trichomonas gallinae
Ênfase
Pesquisa
Data inicial - Data final
01/06/2025 - 01/06/2027
Unidade de Origem
Coordenador Atual
Área CNPq
Ciências Biológicas
Resumo
Trichomonas gallinae, é um protozoário flagelado que afeta aves tem o pombo doméstico (Columba livia) como o hospedeiro primário e o principal disseminador desta doença. A problemática desta parasitose é por conta do surgimento de lesões orofaríngeas que comprometem a alimentação e a respiração, em casos mais graves, podendo levar à morte dos animais. O tratamento convencional utiliza fármacos do grupo dos 5-nitroimidazóis, como o metronidazol, que, apesar de eficazes, os medicamentos apresentam problemas como resistência parasitária e efeitos colaterais significativos, incluindo náuseas e perda de peso.
Diante dessas limitações, o reposicionamento de fármacos se apresenta como uma alternativa promissora para o combate à tricomonose aviária. Essa prática visa acelerar o desenvolvimento de medicamentos ao reutilizar fármacos já existentes para tratar outras doenças. Com isso, as vantagens incluem a redução significativa do tempo e dos custos envolvidos na pesquisa e desenvolvimento de novos fármacos. Os fármacos anticoccídeos surgem como uma alternativa promissora para o reposicionamento, por dois motivos, são normalmente utilizados em aves o que demonstra certa segurança no tratamento destes animais e são obrigatoriamente antiprotozoários, podendos atuar de forma similar em Trichomonas gallinae.
Dito isto, o projeto irá avaliar diversos medicamentos obtidos comercialmente, posteriormente iremos realizar o chamado screening, ou seja, iremos analisar quais medicamentos apresentam atividade tricomonicida (neutralizando os parasitos). Consequentemente, iremos avaliar a atividade desde medicamentos segundo a metodologia de (Sena-Lopes et al., 2017) no qual o parasito irá ser acondicionados com diversas concentrações dos medicamentos além dos controles positivo e negativo por até 96h para avaliar a potencial atividade tricomonicida.
Posterior ao teste in vitro, faremos as análises estatísticas adequadas para entender em qual concentração teremos a melhor atividade.
Objetivo Geral
Avaliar a eficácia do reposicionamento de compostos anticoccidiános em isolados de Trichomonas gallinae.
Justificativa
Tendo em vista as falhas medicamentosas durante o tratamento (Baccega et al., 2019), além dos casos de resistência ao tratamento convencional (Cai et al.,2024), o reposicionamento de fármacos torna-se uma alternativa relevante para o combate da tricomonose aviária.
Metodologia
Para avaliação da atividade tricomonicida os medicamentos serão adquiridos de forma comercial. Posteriormente, foi realizado o screening no qual, os medicamentos foram diluídos com o auxílio de DMSO (Dimetilsulfóxido) a partir da dose terapêutica indicada na embalagem.
A metodologia será realizada de acordo com Sena-Lopes e colaboradores, parar realização do teste, em cada poço foi adicionado 150μl de cultura com densidade 2x106 trofozoítos/mL em meio TYM e 50μl de solução contendo o tratamento com meio TYM. Essas placas foram incubadas a 37ºC em 5% CO2, por 24 horas.
Após este período, as placas foram removidas da estufa e foi pego uma pequena alíquota e homogeneizada ao corante azul de tripano 0,4%, tendo uma concentração de (1:1, v/v). Posteriormente será realizada uma análise em câmara de Neubauer e microscópio óptico tendo como parâmetros a morfologia, motilidade e viabilidade dos trofozoítos.
Os controles que utilizados para cada ensaio serão, o controle nefativo (contendo apenas os trofozoítos e meio TYM, o controle de diluente, utilizando o DMSO a 0,6% e por fim, o controle positivo, no qual será utilizado o MTZ na concentração padrão de 25 μg/ml.
Após as leituras serão estipuladas as CIM (concentração inibitória mínima), já o IC50 será estabelecido por meio de análises estatísticas.
Posterior aos testes já citados, será realizado a curva de crescimento cinético, na qual terá a CIM como concentração norteadora, neste teste será utilizado 03 concentrações (uma abaixo, a CIM e uma acima), tendo como objetivo, uma maior precisão no ensaio in vitro, nesta etapa, as leituras serão realizadas nos seguintes períodos: 1h, 6h, 12h, 24h, 36h, 48h, 72h e 96h.
Os parâmetros para a metodologia serão todos padronizados para ter a menor taxa de erro possível, no qual o meio TYM terá o pH em 7.2, já as placas serão incubadas a 37º C, com 5% de CO2, de acordo com o protocolo estabelecido por Sena-lopes et al., 2017).
A metodologia será realizada de acordo com Sena-Lopes e colaboradores, parar realização do teste, em cada poço foi adicionado 150μl de cultura com densidade 2x106 trofozoítos/mL em meio TYM e 50μl de solução contendo o tratamento com meio TYM. Essas placas foram incubadas a 37ºC em 5% CO2, por 24 horas.
Após este período, as placas foram removidas da estufa e foi pego uma pequena alíquota e homogeneizada ao corante azul de tripano 0,4%, tendo uma concentração de (1:1, v/v). Posteriormente será realizada uma análise em câmara de Neubauer e microscópio óptico tendo como parâmetros a morfologia, motilidade e viabilidade dos trofozoítos.
Os controles que utilizados para cada ensaio serão, o controle nefativo (contendo apenas os trofozoítos e meio TYM, o controle de diluente, utilizando o DMSO a 0,6% e por fim, o controle positivo, no qual será utilizado o MTZ na concentração padrão de 25 μg/ml.
Após as leituras serão estipuladas as CIM (concentração inibitória mínima), já o IC50 será estabelecido por meio de análises estatísticas.
Posterior aos testes já citados, será realizado a curva de crescimento cinético, na qual terá a CIM como concentração norteadora, neste teste será utilizado 03 concentrações (uma abaixo, a CIM e uma acima), tendo como objetivo, uma maior precisão no ensaio in vitro, nesta etapa, as leituras serão realizadas nos seguintes períodos: 1h, 6h, 12h, 24h, 36h, 48h, 72h e 96h.
Os parâmetros para a metodologia serão todos padronizados para ter a menor taxa de erro possível, no qual o meio TYM terá o pH em 7.2, já as placas serão incubadas a 37º C, com 5% de CO2, de acordo com o protocolo estabelecido por Sena-lopes et al., 2017).
Indicadores, Metas e Resultados
A meta é selecionar pelo menos cinco fármacos com potencial mecanismo de ação contra protozoários e obter eficácia maior que 90% dos fármacos testados em pelo menos três concentrações diferentes. Também obter resultados consistentes para gerar pelo menos 1 manuscrito ou resumo ao final da avaliação in vitro e a divulgação científica dos achados preliminares com possibilidade de expansão para modelos in vivo.
Equipe do Projeto
| Nome | CH Semanal | Data inicial | Data final |
|---|---|---|---|
| AIRAN DE QUEVEDO FERNANDES | |||
| CAMILA BELMONTE OLIVEIRA | 3 | ||
| Filipe Obelar Martins | |||
| JULIA VICTORIA SANTOS DE SOUZA | |||
| RONYSSA DOS SANTOS RIBEIRO | |||
| YAN WAHAST ISLABÃO |
Fontes Financiadoras
| Sigla / Nome | Valor | Administrador |
|---|---|---|
| PROAP/CAPES / Coordenação de Aperfeiçoamento de Nível Superior | R$ 3.000,00 | Coordenador |
Plano de Aplicação de Despesas
| Descrição | Valor |
|---|---|
| 339030 - Material de Consumo | R$ 3.000,00 |