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A identificação de novas cepas probióticas com potencial de aplicação funcional pode ampliar as possibilidades de uso do colostro, favorecendo o desenvolvimento de alimentos funcionais e intervenções terapêuticas inovadoras.

O isolamento das bactérias será realizado a partir de amostras de colostro bovino
previamente armazenadas no laboratório de Microbiologia e Bioprospecção da Universidade
Federal de Pelotas.

A identificação taxonômica das linhagens não geneticamente redundantes será realizada por
meio da técnica de Ionização por Dessorção a Laser Assistida por Matriz com Tempo de Voo
(MALDI-TOF), conforme protocolo descrito por Nacef et al. (2017). Essa etapa será conduzida
em parceria com a Universidade Federal do Rio Grande do Sul.

Antes da realização dos testes fenotípicos e da avaliação do potencial probiótico
propriamente dito, será realizado um screening preliminar para garantir a segurança dos
isolados. Serão conduzidos ensaios para verificar a presença de possíveis fatores de virulência,
como a produção das enzimas desoxirribonuclease (DNase), gelatinase e hemolisina (alfa ou
beta), além da análise do perfil de resistência a antimicrobianos de uso clínico. Esses testes permitirão excluir isolados que apresentem características indesejáveis,
assegurando maior segurança para o uso probiótico das cepas selecionadas (KATEETE et al.,
2010; PEREIRA et al., 2009; EATON&GASSON;, 2001).

Susceptibilidade a Antimicrobianos de Uso Clínico
A susceptibilidade dos isolados a antimicrobianos de uso clínico será avaliada por meio do
método de difusão em disco em meio de ágar. Serão preparados inóculos padronizados, e os
isolados serão inoculados em placas contendo meio apropriado. Discos impregnados com
diferentes classes de antimicrobianos serão aplicados sobre as placas, que serão incubadas em
condições controladas. Após o período de incubação, os halos de inibição formados ao redor dos discos serão medidos e classificados quanto à sensibilidade, utilizando critérios previamente estabelecidos na
literatura científica. Esse ensaio permitirá identificar eventuais perfis de resistência
antimicrobiana, contribuindo para a avaliação da segurança das cepas quanto ao seu potencial
uso como probióticos (VLKOVÁ et al., 2006; ALMEIDA-JÚNIOR et al., 2015).

Tolerância a Diferentes Faixas de pH
Para a avaliação da tolerância dos isolados a diferentes faixas de pH, será realizado o cultivo
das cepas em meio de cultura com o pH previamente ajustado de acordo com os valores estabelecidos para o teste. Os valores de pH avaliados incluirão faixas ácidas, neutras e
alcalinas.

Tolerância a Diferentes Concentrações de Sais Biliares
Será avaliada a capacidade de crescimento dos isolados em caldo MRS suplementado com
diferentes concentrações de sais biliares (0,02%, 0,11% e 0,2%). As amostras serão incubadas
a 36 °C por 24 horas, e o crescimento será medido por leitura da absorbância a 600 nm. Um
caldo sem inóculo será utilizado como branco, e um meio sem suplementação de sais biliares
servirá como controle (PERELMUTER, FRAGA E ZUNINO, 2008).

Capacidade de Hidrofobicidade
A hidrofobicidade será avaliada conforme metodologia descrita por Collado, Meriluoto e
Salminen (2008). A suspensão celular será previamente ajustada a uma absorbância de 0,25 ±
0,02 em tampão fosfato salino (PBS) a 600 nm. Em seguida, será adicionada uma fração de
xileno à suspensão, com agitação e posterior repouso a 36 °C. Após a separação das fases,
será realizada a leitura da absorbância da fase aquosa, permitindo avaliar o grau de
hidrofobicidade das células bacterianas.

Atividade Antagonista Contra Patógenos
A atividade antimicrobiana dos isolados será verificada por meio do método de difusão em
ágar. A cepa teste (Escherichia coli ATCC 8739) será cultivada e padronizada. Após a
semeadura em ágar BHI, serão feitos poços nas placas para aplicação do sobrenadante dos
isolados. As placas serão incubadas e observadas quanto à formação de halos de inibição,
indicando possível atividade antagonista (PURUTOĞLU et al., 2020).

Tolerância ao Trânsito Gastrointestinal Simulado
Os microrganismos serão expostos, inicialmente, a uma solução ácida com pepsina,
simulando o ambiente gástrico. Após incubação, as células sobreviventes serão transferidas
para uma solução contendo bile e pancreatina, simulando o intestino delgado. Será realizada a contagem de microrganismos antes e depois da exposição para análise da sobrevivência
(HUANG, ADAMS, 2004).

Os resultados esperados deste estudo poderão abrir caminhos relevantes para futuras
investigações e aplicações práticas no campo da microbiologia aplicada e da ciência de
alimentos. O isolamento de cepas com perfil probiótico promissor a partir do colostro bovino
poderá ampliar o repertório de microrganismos com potencial funcional, especialmente aqueles
adaptados a uma matriz biologicamente ativa e rica em nutrientes, como é o caso do colostro. A
caracterização dessas cepas poderá fundamentar sua inclusão em formulações probióticas
inovadoras.
Além disso, este estudo reforça os indícios do colostro como uma matriz alternativa viável
para a obtenção de probióticos, o que representa uma abordagem ainda pouco explorada na
literatura científica. O reconhecimento do colostro como fonte microbiana pode estimular novas
linhas de pesquisa voltadas à comparação entre matrizes tradicionais e não convencionais,
promovendo a diversificação de fontes e ampliando as possibilidades de uso de subprodutos de
origem animal de forma sustentável.
Nesse sentido, o presente trabalho também contribui para a valorização de um
subproduto agropecuário frequentemente descartado ou subutilizado, alinhando-se aos
princípios da sustentabilidade e do aproveitamento integral de recursos na cadeia produtiva.
Essa perspectiva pode fomentar o desenvolvimento de novas tecnologias voltadas à
conservação, ao reaproveitamento e à comercialização do colostro bovino como matéria-prima
microbiológica