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O melanoma é uma das neoplasias mais agressivas, responsável por grande parte das mortes por câncer de pele, enquanto o câncer de bexiga permanece um dos tumores urológicos mais prevalentes. Apesar dos avanços em imunoterapia, muitos pacientes apresentam resistência ou resposta limitada aos tratamentos atuais.

O BCG é a única imunoterapia consolidada para câncer de bexiga e apresenta potencial para outras aplicações oncológicas, incluindo melanoma. No entanto, o BCG convencional possui limitações, como baixa especificidade tumoral e eficácia variável. A engenharia genética permite superar essas restrições por meio da geração de BCG recombinante e proteínas multiepítopos capazes de modular o sistema imune de forma mais direcionada.

A proposta se justifica pela necessidade de:

- desenvolver novas plataformas imunoterapêuticas mais específicas e eficientes;

- gerar conhecimento pré-clínico robusto para inovação em oncologia humana e veterinária;

- ampliar estratégias terapêuticas com potencial impacto translacional e tecnológico;

- fortalecer parcerias institucionais e formação de recursos humanos em biotecnologia e imunoterapia.

1. Etapa Molecular – Construção, caracterização e produção

Seleção aberta de alvos biológicos (antígenos, citocinas, epítopos, moduladores).

Síntese de genes/proteínas de interesse.

Clonagem em vetores apropriados (pAE, pUS, pET).

Transformação e expressão em E. coli, M. bovis BCG ou outros microrganismos.

Validação molecular: PCR, digestão, sequenciamento.

Validação de expressão: SDS-PAGE e Western blot.

Produção de proteínas recombinantes e multiepítopos purificadas.

2. Etapa Celular – Ensaios funcionais in vitro

Cultura de linhagens de células tumorais ( humanas, caninas e murinas) e imunológicas.

Testes em linhagens de melanoma e bexiga, humanas, murinas e caninas.

Ensaios de viabilidade (MTT), proliferação e apoptose (citometria).

Co-cultivo com macrófagos humanos e murinos.

Dosagem de citocinas (ELISA).

Análise de expressão gênica (RT-qPCR) e proteica (Western blot).

Avaliação da modulação do microambiente tumoral.

3. Etapa Celular Comparativa – Testes entre múltiplas linhagens

Avaliação paralela de eficácia em diferentes espécies e tecidos.

Identificação de perfis responsivos para priorização de construções.

INDICADORES

Nº de vetores/cepas recombinantes construídas.

Nº de proteínas produzidas.

Nº de linhagens testadas.

Nº de ensaios celulares e moleculares realizados.

Nº de experimentos in vivo.

Publicações e patente.


METAS

Construir vetores e cepas recombinantes.

Produzir proteínas recombinantes.

Testar em linhagens de melanoma e bexiga.

Realizar ensaios in vitro e análises moleculares.

Gerar dados para publicação/patente.


RESULTADOS ESPERADOS (bem curtos)

Construções recombinantes funcionais.

Proteínas purificadas.

Evidência de resposta celular e imunológica.

Comparação entre linhagens tumorais.

Produção científica e possível patente.