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01/03/2009 - 01/03/2015

Ciências Agrárias - Ciência e Tecnologia de Alimentos - Microbiologia de Alimentos

Saccharomyces boulardii (Sb) vem sendo utilizado como probiótico ou agente bioterapêutico, pois exerce efeitos benéficos à mucosa intestinal do hospedeiro, como incremento da resposta imune, da digestão e absorção de nutrientes. Também tem demonstrado eficácia na prevenção ou tratamento de várias desordens intestinais. Probióticos recombinantes vêm sendo desenvolvidos visando a potencialização de sua ação ou a agregação de novos efeitos. Entretanto, vetores plasmidiais para expressão de proteínas heterólogas em Sb ainda não estão disponíveis. Com isso, a construção de uma cepa de Sb recombinante, capaz de expressar proteínas heterólogas de interesse, como proteínas terapêuticas ou imunogênicas e antígenos para serem utilizados na produção de vacinas e de insumos para diagnóstico, torna-se atrativa. O objetivo deste projeto é construir e avaliar um probiótico recombinante baseado em Saccharomyces boulardii. Para isso, um plasmídeo integrativo para a expressão de proteínas heterólogas em Sb será construído utilizando um promotor constitutivo forte de S. cerevisae como molde para o desenho de primers visando a amplificação da seqüência homóloga de Sb. O plasmídeo pPICZB de Pichia pastoris será utilizado como esqueleto para a construção do plasmídeo. A avaliação da Sb recombinante como sistema de expressão de proteínas heterólogas será realizada através da expressão da subunidade B da enterotoxina termolábil de E. coli (LTB).