Nome do Projeto
Efeito da estimulação elétrica e magnética em culturas de células neurais de ratos submetidos a um modelo de dor neuropática
Ênfase
PESQUISA
Data inicial - Data final
15/04/2016 - 01/12/2019
Unidade de Origem
Coordenador Atual
Área CNPq
Ciências da Saúde - Medicina - Neurologia
Resumo
Estudos em humanos e em animais têm demonstrado que os quadros de dores crônicas estão associados à estresse crônico, que induz alterações duradouras no sistema neural envolvido na modulação nociceptiva. A continuidade do estímulo nociceptivo local, desencadeia um desequilíbrio homeostático como resposta glial, levando neurônios à disfunção celular e apoptose. Estudos têm sido realizados para identificar estruturas anatômicas, celulares e moleculares que desencadeiam e/ou sustentam a modulação nociceptiva pós estresse. Além disso, há poucos dados obtidos em padrões de estimulação que otimizem respostas celulares específicas. Após uma lesão tecidual, a dor ocorre por ativação das terminações nervosas livres de vias primárias aferentes denominadas nociceptores, induzida por mediadores inflamatórios. Estudos em neurociência têm desenvolvido novas técnicas de neuromodulação da atividade cerebral em vários aspectos, entre elas, a estimulação elétrica por corrente contínua (EE). É um procedimento não-invasivo, promissor na modulação do sistema nervoso central para o alívio da dor. Desta forma, este projeto objetiva avaliar o efeito da EE em cultura de astrócitos e neurônios de córtex cerebral de ratos Wistar. Este estudo tem caráter experimental no qual ratos machos serão induzidos à dor neuropática crônica, e com a subsequente retirada do córtex cerebral total para o cultivo primário de neurônios e astrócitos, serão plaqueados sobre placas-membranas de poliéster contendo eletrodos (placas para eletroestimulação) confeccionadas no hospital de clínicas de Porto Alegre. O efeito da EE na resposta celular, será avaliado por meio de análises morfológicas e bioquímicas. Espera-se, que ao concluir este estudo, tenha-se melhor entendimento dos mecanismos intra e extra-celulares envolvidos na resposta antinociceptiva frente à estimulação elétrica.
Objetivo Geral
Objetivo Primário
O presente projeto objetiva avaliar o efeito da exposição à estimulação elétrica por corrente contínua em cultura primária de neurônios e astrócitos de córtex cerebral de ratos com dor neuropática, submetidos e não submetidos ao estímulo.
Objetivos Secundários
• Estabelecer condições de cultura primária de astrócitos e neurônios de córtex cerebral de ratos neonatos;
• Estabelecer condições EE primeiramente no córtex cerebral de ratos e após diretamente nas culturas primárias de neurônios e astrócitos;
• Avaliar o comportamento das células durante o tempo de cultivo por meio de Microscópio de Luz- Invertido
• Avaliar possíveis alterações morfológicas por meio de Microscópio de Luz Confocal e Microscopia Eletrônica;
• Realizar uma curva de tempo e de intensidade da aplicação dos estímulos em cultura primária de neurônios e astrócitos;
• Avaliar a viabilidade celular por meio do método MTT em cultura primária de neurônios e astrócitos;
• Avaliar o processo de apoptose celular por meio de marcação com DAPI (imunofluorescência) das células em cultura;
• Verificar a expressão de marcadores de dor como, substância P por imunocitoquímica das células em cultura.
• Avaliar a expressão do RNAm de BDNF e mTORpor pelo método de RT-PCR, bem como a imunolocalização destes marcadores por meio de imunohistoquímica das células em cultura.
• Avaliar os níveis de BDNF e de mTOR pelo método de ELISA em homogenado celular e no meio de cultivo;
• Determinar as isoformas específicas de receptores de BDNF (tirosina quinase – TrkB) por meio de imunocitoquímica nas culturas de neurônios;
O presente projeto objetiva avaliar o efeito da exposição à estimulação elétrica por corrente contínua em cultura primária de neurônios e astrócitos de córtex cerebral de ratos com dor neuropática, submetidos e não submetidos ao estímulo.
Objetivos Secundários
• Estabelecer condições de cultura primária de astrócitos e neurônios de córtex cerebral de ratos neonatos;
• Estabelecer condições EE primeiramente no córtex cerebral de ratos e após diretamente nas culturas primárias de neurônios e astrócitos;
• Avaliar o comportamento das células durante o tempo de cultivo por meio de Microscópio de Luz- Invertido
• Avaliar possíveis alterações morfológicas por meio de Microscópio de Luz Confocal e Microscopia Eletrônica;
• Realizar uma curva de tempo e de intensidade da aplicação dos estímulos em cultura primária de neurônios e astrócitos;
• Avaliar a viabilidade celular por meio do método MTT em cultura primária de neurônios e astrócitos;
• Avaliar o processo de apoptose celular por meio de marcação com DAPI (imunofluorescência) das células em cultura;
• Verificar a expressão de marcadores de dor como, substância P por imunocitoquímica das células em cultura.
• Avaliar a expressão do RNAm de BDNF e mTORpor pelo método de RT-PCR, bem como a imunolocalização destes marcadores por meio de imunohistoquímica das células em cultura.
• Avaliar os níveis de BDNF e de mTOR pelo método de ELISA em homogenado celular e no meio de cultivo;
• Determinar as isoformas específicas de receptores de BDNF (tirosina quinase – TrkB) por meio de imunocitoquímica nas culturas de neurônios;
Equipe do Projeto
| Nome | CH Semanal | Data inicial | Data final |
|---|---|---|---|
| ALDRÍO ALVES DA SILVA | 2 | 15/04/2016 | 01/12/2019 |
| ALEXIA CAMARGO KNAPP DE MOURA | 4 | 15/04/2016 | 01/12/2019 |
| ANNA JÚLIA RAMOS FONTANARI | 4 | 15/04/2016 | 01/12/2019 |
| BRUNO ROBERTO PADILHA MACHADO | 4 | 15/04/2016 | 01/12/2019 |
| CAROLINE CRESPO DA COSTA | 8 | 15/04/2016 | 01/12/2019 |
| CLARA CAMACHO DOS REIS | 4 | 15/04/2016 | 01/12/2019 |
| CLARA CAMACHO DOS REIS | 12 | 01/08/2017 | 31/07/2018 |
| CLEVERSON MORAES DE OLIVEIRA | 4 | 15/04/2016 | 01/12/2019 |
| ELIANE FREIRE ANTHONISEN | 2 | 15/04/2016 | 01/12/2019 |
| GIOVANA DUZZO GAMARO | 2 | 15/04/2016 | 01/12/2019 |
| JÉSSICA MARQUES OBELAR RAMOS | 12 | 01/08/2018 | 31/07/2019 |
| JÉSSICA THAMONY CARLOS GONÇALVES | 4 | 15/04/2016 | 01/12/2019 |
| LEO ANDERSON MEIRA MARTINS | 4 | 15/04/2016 | 01/12/2019 |
| LUIS AUGUSTO XAVIER CRUZ | 2 | 15/04/2016 | 01/12/2019 |
| LUIS OTAVIO LOBO CENTENO | 2 | 15/04/2016 | 01/12/2019 |
| Liciane Fernandes Medeiros | 4 | 15/04/2016 | 01/12/2019 |
| MARIANA CORREA FELIPE | 2 | 15/04/2016 | 01/12/2019 |
| OTÁVIO GARCIA MARTINS | 4 | 15/04/2016 | 01/12/2019 |
| PRISCILA CENTENO CRESPO | 4 | 15/04/2016 | 01/12/2019 |
| ROSANGELA FERREIRA RODRIGUES | 2 | 15/04/2016 | 01/12/2019 |
Fontes Financiadoras
| Sigla / Nome | Valor | Administrador |
|---|---|---|
| CNPq | R$ 27.000,00 |