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03/05/2017 - 14/12/2018

Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular

A obesidade tem aumentado em diversos países inclusive no Brasil (Mokdad, Serdula et al., 1999; Graubard et al., 2005). Diversas comorbidades, como diabetes mellitus tipo 2 (T2DM), hipertensão, dislipidemia, entre outras estão relacionadas com a obesidade e vem se tornando problemas de saúde pública (Malnick e Knobler, 2006. Diante deste quadro, os estudos relacionados à obesidade e suas comorbidades se tornam cada vez mais importantes. O desenvolvimento de intervenções para a prevenção e tratamento destas condições requer a compreensão das alterações moleculares que ocorrem nos tecidos. Diversas técnicas foram desenvolvidas para o estudo de expressão gênica, sendo na sua maioria onerosas, ou requerem equipamentos de alto custo. Empresas de biotecnologia desenvolveram kits para a análise de expressão gênica por PCR em tempo real (qPCR) que favorece a análise de diversos genes relacionados a T2DM e obesidade ao mesmo tempo. Estes kits são conhecidos como PCR Arrays apresentados em placas de PCR, geralmente contendo 96 poços, onde cada poço contém os iniciadores de oligonucleotídeos (primers) necessários para a reação de qPCR para cada gene ou para os controles endógenos, facilitando assim análises de múltiplos genes em um único experimento. O desenvolvimento e escolhas dos primers ideais para cada gene envolvido é dispendiosa, tanto financeiramente como em relação ao tempo de bancada. Por causa disso, as empresas mantêm em segredo as sequências dos primers contidos nos PCR Arrays e vendem o produto com alta margem de lucro, o que onera os projetos de pesquisa. Apesar do preço elevado, o PCR Array ainda é uma das formas mais baratas para o estudo da expressão de múltiplos genes, uma vez que dispensa os pesquisadores da árdua tarefa de padronização de cada reação para cada um dos genes a serem estudados. Por outro lado, os camundongos são modelos experimentais bastante úteis para o estudo dos efeitos biológicos in vivo relacionados à diabetes e à obesidade. Por seu tamanho, e pela grande quantidade de modelos com alterações genéticas, eles podem se tornar uma importante ferramenta em estudos genéticos e nutricionais. O menor tamanho, e a facilidade de manipulação permitem economia em insumos e espaço nas salas de experimentação. O objetivo deste estudo é padronizar as reações para pesquisas de expressão dos genes envolvidos no desenvolvimento de diabetes e obesidade em tecidos de camundongos, e disponibilizar estes kits para a comunidade científica.