Nome do Projeto
AVALIAÇÃO DAS RESPOSTAS MORFOLÓGICAS E DE MARCADORES BIOQUÍMICOS EM MODELO DE CULTURA DE NEURÔNIOS DE RATOS WISTAR EXPOSTOS AO MP2.5
Ênfase
PESQUISA
Data inicial - Data final
09/06/2018 - 15/12/2022
Unidade de Origem
Coordenador Atual
Área CNPq
Ciências Biológicas - Fisiologia - Neurofisiologia
Resumo
A exposição aos materiais particulados (MPs) encontrados na atmosfera, representa riscos à saúde e, com o aumento da poluição do ar, observa-se também um incremento na concentração destas substâncias o que impacta negativamente a qualidade de vida dos indivíduos. Os MPs são constituídos por partículas sólidas e líquidas de diversas granulometrias, formas e composição química que variam de acordo com sua origem e fonte, podendo ser naturais ou resultar de reações químicas atmosféricas. Os sistemas primariamente afetados pelo material particulado são os sistemas respiratório e cardiovascular, entretanto o sistema nervoso também se constitui em um importante alvo da ação deletéria dos MPs presentes na atmosfera.
Estudos em humanos e em modelos animal, respectivamente, tem indicado que a poluição ambiental afeta o SNC contribuindo com o desenvolvimento das enfermidades neurodegenerativas, onde os MP’s alcançam o tecido nervoso por meio das vias circulatória e olfatória, gerando a resposta inflamatória e ativação de vias de sinalização relacionadas a inflamação e do estresse oxidativo . Além disso, as MPs associam-se com inúmeras proteínas e moléculas, tais como BDNF, mTOR, IL-1β, TNF, e NF- B. Desta forma, o estudo dos mecanismos pelos quais os MPs interagem com o organismo produzindo alteração homeostática será muito importante. Sendo assim, o presente estudo tem como objetivo avaliar os efeitos à exposição ao material particulado (MP2,5) de cultura primária de neurônios de córtex cerebral de ratos de 15 dias de idade e em linhagem celular SH-SY5Y, bem como, o comportamento das ninhadas de ratas Wistar.
Objetivo Geral
O presente estudo tem por objetivo avaliar os efeitos à exposição ao material particulado (MP2,5) em cultura primária de neurônios de córtex cerebral de ratos de 15 dias de idade e em da linhagem celular SH-SY5Y visando estabelecer a influência do material particulado nos processos bioquímicos, morfológicos e funcionais das células expostas. Ainda serão avaliadas as alterações comportamentais em ratos pós-natais expostos durante o desenvolvimento fetal.
Para isso será necessário:
1-Estabelecer condições de exposição das culturas primárias de neurônios de córtex cerebral de ratos de 15 dias de idade e de neuroblastomas da linhagem celular SH-SY5Y ao poluente MP2.5, nos tempos 24, 48 e 72 horas e 5 dias consecutivos.
2- Avaliar as possíveis alterações morfológicas por meio de microscópio de luz confocal e microscopia eletrônica das culturas celulares.
3- Realizar uma curva de tempo e de exposição aos MP’s em cultura primária de neurônios e de neuroblastomas da linhagem celular SH-SY5Y.
4- Analisar a exclusão para determinar o número de células viáveis da cultura primária de neurônios e de neuroblastomas da linhagem celular SH-SY5Y pelo método de Trypam blue
5- Avaliar a viabilidade celular por meio do método MTT em cultura primária de neurônios e neuroblastomas da linhagem celular SH-SY5Y.
6- Avaliar o processo de apoptose celular por meio de marcação com DAPI (imunofluorescência) das células em cultura.
7- Investigar a resposta inflamatória neuronal resultante da exposição ao MP2,5, por meio da avaliação de marcadores envolvidos substância P, citocinas (TNFα, IL-6, IL-10) das células em cultura, por imunofluorescência.
8- Avaliar a expressão do RNAm de BNDF e mTOR e NF- B pelo método de Western blotting, bem como, a imunolocalização destes marcadores por meio de imunofluorescência
das células em cultura.
9- Avaliar os níveis de BNDF e mTOR pelo método ELISA em homogenado celular e no meio de cultivo.
10- Comparar as alterações morfológicas das diferentes regiões do Sistema Nervoso Central frente a exposição ao MP2,5. por meio de microscópio de luz e confocal.
11- Observar o comportamento da prole exposta ao MP2,5 durante a gestação.
Para isso será necessário:
1-Estabelecer condições de exposição das culturas primárias de neurônios de córtex cerebral de ratos de 15 dias de idade e de neuroblastomas da linhagem celular SH-SY5Y ao poluente MP2.5, nos tempos 24, 48 e 72 horas e 5 dias consecutivos.
2- Avaliar as possíveis alterações morfológicas por meio de microscópio de luz confocal e microscopia eletrônica das culturas celulares.
3- Realizar uma curva de tempo e de exposição aos MP’s em cultura primária de neurônios e de neuroblastomas da linhagem celular SH-SY5Y.
4- Analisar a exclusão para determinar o número de células viáveis da cultura primária de neurônios e de neuroblastomas da linhagem celular SH-SY5Y pelo método de Trypam blue
5- Avaliar a viabilidade celular por meio do método MTT em cultura primária de neurônios e neuroblastomas da linhagem celular SH-SY5Y.
6- Avaliar o processo de apoptose celular por meio de marcação com DAPI (imunofluorescência) das células em cultura.
7- Investigar a resposta inflamatória neuronal resultante da exposição ao MP2,5, por meio da avaliação de marcadores envolvidos substância P, citocinas (TNFα, IL-6, IL-10) das células em cultura, por imunofluorescência.
8- Avaliar a expressão do RNAm de BNDF e mTOR e NF- B pelo método de Western blotting, bem como, a imunolocalização destes marcadores por meio de imunofluorescência
das células em cultura.
9- Avaliar os níveis de BNDF e mTOR pelo método ELISA em homogenado celular e no meio de cultivo.
10- Comparar as alterações morfológicas das diferentes regiões do Sistema Nervoso Central frente a exposição ao MP2,5. por meio de microscópio de luz e confocal.
11- Observar o comportamento da prole exposta ao MP2,5 durante a gestação.
Equipe do Projeto
| Nome | CH Semanal | Data inicial | Data final |
|---|---|---|---|
| ANA PAULA DA SILVA FERREIRA | 20 | 09/06/2018 | 15/12/2022 |
| ANELIZE DE OLIVEIRA CAMPELLO | 4 | 09/06/2018 | 15/12/2022 |
| GIANNA TRUYTS BISCARDI | 4 | 09/06/2018 | 15/12/2022 |
| GIOVANA DUZZO GAMARO | 2 | 09/06/2018 | 15/12/2022 |
| IUNA DE LEON BOTELHO | 8 | 09/06/2018 | 15/12/2022 |
| JÉSSICA MARQUES OBELAR RAMOS | 4 | 09/06/2018 | 15/12/2022 |
| JÉSSICA THAMONY CARLOS GONÇALVES | 4 | 09/06/2018 | 15/12/2022 |
| STEFANIE BENTO MENA | 20 | 01/09/2020 | 31/08/2021 |
| VITÓRIA BORGES FLORENCIO | 4 | 09/06/2018 | 15/12/2022 |