Nome do Projeto
Avaliação de quimeras recombinantes contendo antígenos de Bartonella henselae no desenvolvimento de teste de diagnóstico
Ênfase
PESQUISA
Data inicial - Data final
01/09/2018 - 01/12/2021
Unidade de Origem
Área CNPq
Ciências Biológicas - Imunologia - Imunologia Aplicada
Resumo
Bartonella henselae é uma bactéria Gram-negativa pertencente à família Rhizobiales, de crescimento fastidioso, intracelular facultativa e que pode infectar eritrócitos e células endoteliais de seus hospedeiros. O gênero Bartonella apresenta cerca de 22 espécies relacionadas com doenças em mamíferos, e B. henselae é considerada uma das espécies de maior importância médica, infectando tanto gatos quanto humanos. Os gatos infectados albergam a bactéria no interior de seus eritrócitos, que podem ser ingeridos pelas pulgas (Ctenocephalides felis), permanecendo em seu intestino. Posteriormente, as fezes destas pulgas contaminadas com B. henselae podem ser depositadas na pele dos gatos, e estes, ao se auto arranharem acabam contaminando suas garras. É dessa maneira que os humanos podem ser infectados, pela arranhadura de gatos, assim, B. henselae é considerada agente etiológico da Doença da Arranhadura do Gato (Cat Scratch Disease – CSD), que é uma infecção frequentemente auto-limitante em indivíduos imunocompetentes, e tem como principal sintoma a linfadenopatia regional. O diagnóstico preciso de bartonelose é um grande desafio, principalmente em pacientes com infecção crônica e de longa duração. Diversas técnicas convencionais têm demostrado limitações diagnósticas. O diagnóstico padrão para essa doença é realizado por imunofluorescência indireta utilizando antígenos de células inteiras co-cultivadas em células Vero, que tem boa sensibilidade, no entanto, são caros e costumam apresentar reações cruzadas. Um método de diagnóstico que vem sendo muito utilizado é o ELISA (Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay), que utiliza antígenos de células inteiras, no entanto, apresenta uma baixa sensibilidade e especificidade, assim, a utilização de proteínas purificadas poderia melhorar o diagnóstico desta doença. Alguns estudos com proteínas recombinantes têm sido publicados. Nestes, proteínas reconhecidamente antigênicas, como GroEL, 17-kDa, Pap31, SucB e P26 têm sido produzidas de forma recombinante, e têm sido testadas em ensaios sorológicos, principalmente no ELISA. Entretanto, em todos os ensaios elas foram utilizadas de forma isolada, apresentando baixa sensibilidade, o que reforça o desenvolvimento de ensaios mais sensíveis e específicos. O objetivo desse estudo, é a predição in silico de epítopos estimuladores de linfócitos B e T, em proteínas antigênicas de B. henselae e a produção de proteínas quiméricas de maneira recombinante para uso em diagnóstico sorológico.

Objetivo Geral

Objetivo Geral
• Identificação in silico de proteínas de B. henselae antigênicas para construção de quimeras recombinantes e utilização como insumo no desenvolvimento de um teste de diagnóstico sorológico imunoenzimático para humanos e gatos.

Objetivos Específicos
• Realizar análises “in silico” para a identificação de epítopos antigênicos de proteínas de B. henselae importantes para o diagnóstico sorológico;
• Realizar a modelagem estrutural dos antígenos identificados;
• Desenhar genes sintéticos contendo os epítopos selecionados in silico;
• Expressar e purificar as quimeras recombinantes utilizando sistema heterólogo baseado em Escherichia coli;
• Avaliar a antigenicidade das quimeras recombinantes produzidas utilizando soro humano e de gatos positivo para B. henselae;
• Avaliar a reação das proteínas quiméricas com soros imunes e não imunes de humanos e gatos anti-Bartonella para padronização de soros controles;
• Desenvolver um teste de diagnóstico sorológico baseado em ELISA indireto, para detecção de anticorpos contra B. henselae em humanos e gatos naturalmente infectados;
• Avaliar a acurácia do teste de ELISA desenvolvido para cada uma das quimeras testadas em amostras de soro humano e de gatos.

Equipe do Projeto

NomeCH SemanalData inicialData final
ANDRÉ ALEX GRASSMANN101/09/201801/12/2021
HENRIQUE QUEIROZ SIMÃO801/09/201801/12/2021
JÊNIFER MALHEIROS GONÇALVES2001/09/201801/12/2021
SIBELE BORSUK101/09/201801/12/2021

Página gerada em 19/10/2019 19:33:31 (consulta levou 0.072988s)