Nome do Projeto
Utilização de um composto a base de butafosfan e cianocobalamina em vacas leiteiras: efeitos orexígenos e imunológicos
Ênfase
Pesquisa
Data inicial - Data final
15/05/2020 - 30/09/2022
Unidade de Origem
Coordenador Atual
Área CNPq
Ciências Agrárias
Resumo
Prorrogação -
O período de transição de vacas leiteiras, compreende as três semanas pré-parto até as três semanas pós-parto sendo marcado por intensas modificações a nível nutricional, imune e metabólico as quais demandam uma alta capacidade de adaptação. A redução da Ingestão de Matéria Seca nesse período, associado a maior demanda energética, provoca uma redução nos níveis circulantes de glicose, Insulina e IGF-I e consequente elevação de ácido graxos não esterificados e acetona. A alteração desses metabólitos, tem como principais implicações a redução da função imune predispondo os animais a maior ocorrência de doenças. Diversos estudos vêm sendo realizados buscando minimizar essas alterações no período de transição, neste sentido uma alternativa a ser estudada é a utilização de um composto a base de butafosfan e cianocobalamina. Estas duas moléculas participam do metabolismo energético, onde o fósforo possui um importante papel no ciclo ADP/ATP enquanto a cianocobalamina atua como cofator enzimático da enzima metilmalonil - CoA mutase. Com isso, o objetivo desse estudo é verificar se a utilização de um composto a base de butafosfan e cianocobalamina em vacas leiteiras é capaz de gerar um incremento na IMS, melhorando assim o status metabólico e imune. O estudo será realizado utilizando 187 animais divididos aleatoriamente em 3 grupos com 62 e 63 animais cada de acordo com os tratamentos. O G1 receberá uma dose de Butafosfan associado a cianocobalamina (5mL/ 100Kg) (Catosal B12®) nos dias 21 pré-parto, 0, 3 e 7 dias pós-parto, totalizando 4 doses do produto. O G2 receberá 1 dose de solução salina (5mL/ 100Kg) 21 dias pré-parto e no dia 0 iniciará o tratamento com Butafosfan+cianocobalamina (5mL/ 100Kg), seguindo nos dias 3 e 7 pós-parto, totalizando 3 doses do produto. Grupo 3 receberá 4 doses de solução salina (5mL/ 100Kg) nos dias -21, 0, 3 e 7 pós-parto. Serão realizadas avaliações clínicas e zootécnicas para monitoramento de enfermidades, coletas de sangue para realização de hemograma e avaliações do status mineral, energético e inflamatório dos animais, além de biópsia hepática para avaliação de genes relacionados ao metabolismo energético.
Objetivo Geral
Objetivo geral
Verificar se a utilização de um composto a base de butafosfan e cianocobalamina em vacas leiteiras é capaz de gerar um incremento na IMS, melhorar o status metabólico e imune.
Objetivos específicos
1) Avaliar se a administração de butafosfan + cianocobalamina no periparto:
a) produz um efeito orexígeno aumentando a IMS em vacas leiteiras e por consequência, atenuando o BEN nos primeiros 28 dias de lactação.
b) pode gerar uma melhoria na função do sistema imune através do aumento do número e atividade de neutrófilos.
c) pode reduzir a ocorrência de doenças.
Verificar se a utilização de um composto a base de butafosfan e cianocobalamina em vacas leiteiras é capaz de gerar um incremento na IMS, melhorar o status metabólico e imune.
Objetivos específicos
1) Avaliar se a administração de butafosfan + cianocobalamina no periparto:
a) produz um efeito orexígeno aumentando a IMS em vacas leiteiras e por consequência, atenuando o BEN nos primeiros 28 dias de lactação.
b) pode gerar uma melhoria na função do sistema imune através do aumento do número e atividade de neutrófilos.
c) pode reduzir a ocorrência de doenças.
Justificativa
A prorrogação é necessária pois ainda restam fazer análises referente a expressão gênica de amostras de tecido hepática previamente coletadas e armazenadas. A partir desses resultados será gerado um manuscrito submetido a revista qualis A1.
Metodologia
Para a análise da expressão gênica do tecido hepático e das células da
granulosa, será extraído o RNA total usando reagente Trizol (Invitrogen, USA)
junto com um sistema de purificação por coluna (MiRNEasy mini Kit, Qiagen,
Alemanha) e tratado com DNAse (Qiagen, Alemanha), seguindo as
recomendações do fabricante. A concentração do RNA total será obtida em espectofotômetro Nanodrop Lite (Thermo Fischer Scientific Inc., USA) e a
integridade do RNA será verificada por eletroforese em gel de agarose (80V,
durante 1,5 horas). O DNA complementar (cDNA) será sintetizado utilizando iscript cDNA synthesis Kit (Bio-Rad, USA) em termociclador MyCycle TM Thermo
Cycler (Bio Rad, USA) no volume de 20 µL usando as seguintes temperaturas:
25°C por 5 min, 42ºC por 30 min e 85°C por 5 min.
A PCR em tempo real (RTq-PCR) será conduzida usando SYBR Green
Mastermix (Applied Biosystems®, Foster City, CA, USA) no equipamento 7500
RT-PCR (Applied Biosystems®). Para cada ensaio serão corridos 40 ciclos (95
°C durante 15s e 60 °C durante 30s) e uma curva de dissociação vai ser incluída
no final da reação para verificar a amplificação de um único produto de PCR. .
A expressão relativa será calculada a partir da equação 2
A-B/2C-D (em
que A é o valor limiar do ciclo [Ct] para o gene de interesse na primeira amostra
do controle; B, o valor de Ct para o gene de interesse na amostra analisada; C,
o valor de Ct para o gene controle na primeira amostra do controle e D, o número
Ct para o gene controle na amostra analisada). A primeira amostra do controle
será expressa como 1,00 por esta equação, e todas as outras amostras serão
calculadas em relação a este valor. Depois disso, os resultados do grupo controle
serão ponderadas e todos os outros resultados serão divididos pelo valor médio
da expressão relativa neste grupo, para se obter a mudança na expressão dos
genes de interesse em comparação com o grupo de controle (Fold change)
(Masternak et al. 2005). O gene de transcrição da ubiquitina (UXT) será o
controle nas amostras de fígado (Bionaz & Loor, 2007) e o gene histona
membro da família Z (H2AFZ) será utilizado como controle nas amostras de
células da granulosa.
granulosa, será extraído o RNA total usando reagente Trizol (Invitrogen, USA)
junto com um sistema de purificação por coluna (MiRNEasy mini Kit, Qiagen,
Alemanha) e tratado com DNAse (Qiagen, Alemanha), seguindo as
recomendações do fabricante. A concentração do RNA total será obtida em espectofotômetro Nanodrop Lite (Thermo Fischer Scientific Inc., USA) e a
integridade do RNA será verificada por eletroforese em gel de agarose (80V,
durante 1,5 horas). O DNA complementar (cDNA) será sintetizado utilizando iscript cDNA synthesis Kit (Bio-Rad, USA) em termociclador MyCycle TM Thermo
Cycler (Bio Rad, USA) no volume de 20 µL usando as seguintes temperaturas:
25°C por 5 min, 42ºC por 30 min e 85°C por 5 min.
A PCR em tempo real (RTq-PCR) será conduzida usando SYBR Green
Mastermix (Applied Biosystems®, Foster City, CA, USA) no equipamento 7500
RT-PCR (Applied Biosystems®). Para cada ensaio serão corridos 40 ciclos (95
°C durante 15s e 60 °C durante 30s) e uma curva de dissociação vai ser incluída
no final da reação para verificar a amplificação de um único produto de PCR. .
A expressão relativa será calculada a partir da equação 2
A-B/2C-D (em
que A é o valor limiar do ciclo [Ct] para o gene de interesse na primeira amostra
do controle; B, o valor de Ct para o gene de interesse na amostra analisada; C,
o valor de Ct para o gene controle na primeira amostra do controle e D, o número
Ct para o gene controle na amostra analisada). A primeira amostra do controle
será expressa como 1,00 por esta equação, e todas as outras amostras serão
calculadas em relação a este valor. Depois disso, os resultados do grupo controle
serão ponderadas e todos os outros resultados serão divididos pelo valor médio
da expressão relativa neste grupo, para se obter a mudança na expressão dos
genes de interesse em comparação com o grupo de controle (Fold change)
(Masternak et al. 2005). O gene de transcrição da ubiquitina (UXT) será o
controle nas amostras de fígado (Bionaz & Loor, 2007) e o gene histona
membro da família Z (H2AFZ) será utilizado como controle nas amostras de
células da granulosa.
Indicadores, Metas e Resultados
Metas:
Durante o período do projeto:
• Produzir uma tese de Doutorado;
16
• Publicar, pelo menos, 4 artigos em revistas de circulação nacional ou
internacional, classificadas como “A” no “Sistema de Classificação de
Periódicos, Anais e Revistas” da CAPES;
• Divulgar os resultados em 3 congressos da área em âmbito internacional,
2 nacionais e 3 regionais;
• Realizar o intercâmbio entre pelo menos 2 grupos de pesquisa de
instituições internacionais que desenvolvam projetos nesta mesma linha
ou afins, através de visitas técnicas e participação de estudantes de pósgraduação.
Indicadores:
Durante o período do projeto:
• Aumentar o número de artigos de alta qualidade na equipe;
• Aumentar o número de estudantes participando de congressos
relacionados as linhas de pesquisa da equipe;
Durante o período do projeto:
• Produzir uma tese de Doutorado;
16
• Publicar, pelo menos, 4 artigos em revistas de circulação nacional ou
internacional, classificadas como “A” no “Sistema de Classificação de
Periódicos, Anais e Revistas” da CAPES;
• Divulgar os resultados em 3 congressos da área em âmbito internacional,
2 nacionais e 3 regionais;
• Realizar o intercâmbio entre pelo menos 2 grupos de pesquisa de
instituições internacionais que desenvolvam projetos nesta mesma linha
ou afins, através de visitas técnicas e participação de estudantes de pósgraduação.
Indicadores:
Durante o período do projeto:
• Aumentar o número de artigos de alta qualidade na equipe;
• Aumentar o número de estudantes participando de congressos
relacionados as linhas de pesquisa da equipe;
Equipe do Projeto
| Nome | CH Semanal | Data inicial | Data final |
|---|---|---|---|
| ANTÔNIO AMARAL BARBOSA | |||
| BERNARDO DA SILVA MENEZES | |||
| BRUNA EMANUELE DA SILVA VELASQUEZ | |||
| BRUNO AUGUSTO OSTERKAMP BLOEMKER | |||
| CAMILA PIZONI | |||
| CASSIO CASSAL BRAUNER | 1 | ||
| EDUARDO SCHMITT | 1 | ||
| FRANCISCO AUGUSTO BURKERT DEL PINO | 1 | ||
| JORDANI BORGES CARDOSO | |||
| JOSIANE DE OLIVEIRA FEIJÓ | |||
| KAUANI BORGES CARDOSO | |||
| MARCIO NUNES CORREA | 3 | ||
| VINICIUS DE SOUZA IZQUIERDO | |||
| VIVIANE ROHRIG RABASSA | 1 |