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O Brasil tem um papel de destaque no cenário mundial de produção de leite, e esse alimento é utilizado como matéria-prima para uma variedade de derivados lácteos. A segurança micotoxicológica desses alimentos é de extrema importância, pois há um elevado consumo de leite líquido por crianças e idosos e sabe-se que os tratamentos térmicos aplicados na indústria não afetam as aflatoxinas, corroborando para a busca de métodos alternativos. A SCB é um procedimento comum em propriedades leiteiras, e é um produto pouco explorado quanto a suas aplicações em outros processos.
Esse tipo de fermentacao seria capaz de reduzir a contaminacao por micotoxinas quando utilizado combacterias especificas identificadas nesse processo

As amostras de colostro bovino (n = 50) serão adquiridas em propriedades leiteiras localizadas na cidade de Pelotas, no estado do Rio Grande do Sul. As amostras serão acondicionadas em garrafas de plástico (500 mL) e armazenadas sob congelamento até o momento das análises.
As amostras de colostro bovino serão envasadas em garrafas plásticas de 500 mL, armazenadas verticalmente e fermentadas anaerobicamente (após o envase do colostro, a garrafa deve ser apertada até que líquido atingir a superfície onde encaixa a tampa) a temperatura ambiente por no mínimo 21 dias. Após o tempo de fermentação, as amostras serão homogeneizadas em blender durante 30 s, colocadas em recipientes plásticos estéreis de 80 mL e armazenadas congeladas até o momento das análises.

Os parâmetros físico-químicos do colostro e silagem de colostro que serão determinados: acidez (n.° 427/IV), proteína (n.° 037/IV), sólidos totais (n.° 429/IV) e cinzas (n.°437/IV), utilizando os métodos do Instituto Adolfo Lutz (2008).
A análise microbiológica será desenvolvida de acordo com o método proposto por Saalfeld et al. (2013) com adaptações. As amostras de silagem e colostro bovino serão semeadas nos meios de cultivo: ágar Chapman, ágar MacConkey, ágar Brain Heart Infusion e ágar seletivo para Lactobacillus. Em seguida, as placas serão incubadas a 37 °C durante 72 h em aerobiose. A identificação dos micro-organismos será através da técnica de coloração de Gram e provas bioquímicas (BARROW; FELTHAM, 1993).

O planejamento experimental será desenvolvido com o colostro bovino fortificado com os padrões de aflatoxinas M1 e B1, previamente ao início da fermentação e, para cada ensaio, haverá a amostra controle de colostro in natura sem contaminação. As variáveis avaliadas no planejamento serão: tempo (V1) e temperatura de fermentação (V2) (n = 2), que serão analisadas aos 21, 71, 193, 315 e 365 dias e 15,0; 17,9; 25,0; 32,1 e 35,0 °C, respectivamente. Além disso, o planejamento contará com três pontos centrais (PC) e 4 axiais, totalizando 11 experimentos, como mostra a Tabela 1. Cabe destacar que esses ensaios serão contaminados com os padrões de aflatoxinas em concentrações a definir.

A extração de aflatoxina M1 e B1 em amostras de silagem de colostro bovino e colostro bovino será realizada em triplicata, utilizando o método de QuEChERS (SARTORI et al., 2015) com adaptações de Freitas (2020). Primeiramente, será realizado o preparo da amostra, para isso 30 mL de amostra será colocada em tubo falcon de 50 mL para posterior centrifugação (3000 x g, 5 min, 4 °C) e remoção manual da gordura, este procedimento deve ser realizado três vezes. Logo após, 5 mL da amostra sem gordura deverá ser transferida para um novo tubo e será adicionado 10 mL de hexano, 15 mL de acetonitrila acidificada (1% de ácido acético (v/v)) e o sistema será agitado manualmente durante 1 min. Em seguida, 6 g de sulfato de magnésio e 1,5 g de cloreto de sódio previamente secos serão adicionados e os tubos contendo essa mistura serão submetidos a agitação em vórtex pelo período de 1 min e 30 s e por fim, serão centrifugados novamente (2330 x g, 7 min, 4 °C).
Após o processo de centrifugação, o hexano será removido e 5 mL da fase que contenha a acetonitrila será retirada, recolhida em frasco âmbar e seca a 60 °C em banho-maria. As amostras serão mantidas a -4 °C até o momento da quantificação. É importante salientar que caso seja necessário serão feitas adaptações em decorrência das diferenças da matriz original.
A quantificação das micotoxinas será realizada de acordo com Gonçalves et al. (2018), com adaptações descritas por Freitas (2020). A partir do extrato seco, os mesmos serão ressuspensos em fase móvel composta por acetonitrila: metanol: água ultrapura (24:16:60, v/v). Os compostos serão identificados utilizando um cromatógrafo líquido de alta eficiência acoplado a um detector de fluorescência com derivatizador fotoquímico pós-coluna, coluna Kromasil C18 (5 µm, 15 cm x 4,6 mm) com vazão de fase móvel de 1 mL min-1, temperatura de forno de 40 °C e processamento no software LC Solution. Os comprimentos de onda de emissão e excitação serão 370 e 410 nm, respectivamente, o volume de injeção da amostra será de 20 µL e o tempo de corrida cromatográfica será de aproximadamente 12 min. Este método será validado através do estudo dos seguintes parâmetros: seletividade, limite de detecção, limite de quantificação, curva de calibração, precisão, exatidão e robustez.

Os resultados serão avaliados através da análise de variância (ANOVA) seguido do teste de Tukey, com 95% de confiança com o uso do software Statistica 10.

Ao final dos experimentos espera-se que a fermentação do CB proporcione a
descontaminação ou redução das aflatoxinas M1 e B1 e a partir da identificação dos microorganismos responsaveis pela diminuição dos níveis das toxinas pretende-se propor um método
de detoxificação que possa ser aplicado em CB, SCB, leite e derivados lácteos, buscando atingir
os níveis de AFLA preconizados pela Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA).
As contribuições científicas deste trabalho serão por publicações em periódicos, participação e apresentação de trabalhos em simpósios e congressos.